Модификатор ржавчины мр 1 отзывы: Преобразователь (модификатор) ржавчины мр-1

Содержание

Преобразователи ржавчины — что это такое, разновидности, способы применения

Около четверти всего металла, добываемого в мире, расходуется на замену повреждённых коррозией деталей. Сегодня большое распространение получили модификаторы или нейтрализаторы — преобразователи ржавчины, позволяющие удалять очаги коррозии химическим способом.

Разновидности средств

Преобразователи вступают в реакцию с ржавчиной, образуя химически инертный слой на поверхности. Коррозия исчезает всего за несколько минут. Появившийся защитный слой на некоторое время предотвращает повторное ржавление металла.

Эти составы в зависимости от химического состава бывают кислотными или нейтральными.

Выгода от их применения очевидна: при соблюдении технологии они гарантированно удаляют ржавчину и подготавливают поверхность к нанесению краски или другого покрытия.

Фосфатирующие преобразователи ржавчины

Средства предназначены для изделий из чёрных металлов и алюминия. Основное действующее вещество — ортофосфорная кислота. Целевые присадки в составе придают средствам дополнительные свойства. Обязательно содержат ингибиторы, которые препятствуют разрушению поверхности металла в кислой среде.

Наша компания КрасКо разработала два фосфатирующих преобразователя ржавчины. Специально созданные составы эффективно борются с коррозией.

Фосфомет — водный раствор ортофосфорной кислоты с добавками и ингибитором. Предназначен для стальных, чугунных, алюминиевых и оцинкованных поверхностей.

Фосфомет-Зима — модифицированный фосфатирующий состав на основе Фосфомета, созданный для работы в морозы, до -15°С. Но так как верхний показатель рабочей температуры +40°C, его можно назвать всесезонным.

Принцип действия

Под воздействием ортофосфорной кислоты и целевых добавок на месте коррозии образуется химически инертный слой. Он называется фосфатной плёнкой и состоит из нерастворимых солей марганца, железа и цинка.

Плёнка создаёт хорошее сцепление металлов с лакокрасочными покрытиями и защищает от коррозии.

Средство можно наносить разными способами: кисть, валик, протирка ветошью, окунание или распыление.

Особенности

Фосфатирующие составы содержат кислоту. Поэтому наносить их следует только на очаги коррозии, не затрагивая свободные от ржавчины участки. Это особенно важно при обработке оцинкованных металлов. Иначе слой цинка разрушается.

Образованный защитный слой нельзя промывать и обрабатывать механическим способом. Он может стереться.

ЛКМ наносят на полностью высохшую поверхность, но не позднее двух суток после удаления ржавчины.

Преимущества

Имеется состав для зимних работ.

Не требуют особых условий для работы.
Имеется состав для зимних работ.
После нанесения не требуется промывка и дополнительная обработка поверхности.
Широкий диапазон температуры хранения: от -20°С до +40°С.
Продаются в тарах разной вместимости: по 1, 6,5 и 12 кг.

Недостатки

Техника безопасности

Использовать индивидуальные средства защиты. Если работы проводятся в помещении, обеспечить хорошую вентиляцию.

Если Фосфомет попал на кожу, тщательно промыть её водой. При попадании в глаза промыть обильно водой, обратиться к врачу.

Нейтральные преобразователи ржавчины

Преобразователи ржавчины, не содержащие кислот, завоёвывают всё большую популярность. Они низкотоксичны и просты в применении.

Активным компонентом является растительное вещество танин. Аналогичные соединения содержатся в чае, дубовой коре, лиственнице, черёмухе и др.

Армасил. Он предназначен для обработки изделий из чёрного металла: арматурных стержней, труб, металлопроката и др.

Этот состав представляет собой сложную композицию на основе растительных танинов, ингибиторов коррозии, стабилизаторов и функциональных добавок.

Процесс преобразования происходит в нейтральных средах, при рН 5,0-6,0. Поэтому не поражённый ржавчиной металл не разрушается, как от кислоты.

Армасил отлично заменяет механический способ очистки металлов от коррозии. Может применяться для плотной ржавчины толщиной до 150 мкм. При такой толщине состав наносится в 2-3 слоя.

Принцип действия

Нейтрализатор переводит оксиды металла в коррозионно-неактивные соединения, обладающие отличной адгезией к металлу. Цвет ржавчины при этом меняется с коричневого на чёрный.

Работать можно валиком, кистью или распылителем. Или окунать деталь в раствор.

Металл можно красить или бетонировать сразу после высыхания пропитки. Она сохнет 1-3 часа, в зависимости от влажности и температуры воздуха.

Особенности

Изменение цвета ржавчины на чёрный позволяет визуально определять качество обработки поверхности. Если ржавчина осталась, Армасил можно наносить во второй и в третий раз по непросохшей поверхности

Преобразователь можно использовать для межоперационного хранения металлических изделий. При отсутствии атмосферных осадков защищает металл от коррозии до 18 дней.

Не требует промывки водой после обработки.

Преимущества

В составе отсутствуют вредные для здоровья компоненты.
Можно применять в полевых условиях.
Качество обработки контролируется визуально.
Быстро высыхает, максимум за 3 часа.

Недостатки

Техника безопасности

Использовать индивидуальные средства защиты. При попадании в глаза промыть водой.

Нейтрализаторы коррозии: выгода

Преобразователи ржавчины позволяет эффективно бороться с коррозией металла. Современные средства обеспечивают максимальную нейтрализацию ржавчины и защиту металла от повторного поражения. Для закрепления эффекта следует применять специальные антикоррозионные грунты или краски.

Простая технология нанесения позволяет применять средства в полевых условиях. И предотвращать распространение коррозии на работающих металлоконструкциях, механизмах.

Своевременное применение преобразователей помогает экономить деньги и предупреждать остановку на длительный ремонт на производстве.

На нашем сайте вы можете ознакомиться с различными способами защиты металла от коррозии. Статьи на эту тему расположены в разделах «Антикоррозионные материалы и покрытия» и «Компания КрасКо — Вопрос-ответ».

Звоните нам. Специалисты Компании КрасКо подберут оптимальный вариант антикоррозионного покрытия металла для вашего случая.

Модификатор ржавчины МР-1, 1 л

Модификатор ржавчины МР-1, 1 л — Описание товара

КУПИТЬ ПРЕОБРАЗОВАТЕЛЬ РЖАВЧИНЫ, 1 л

Предназначен для обработки металлической поверхности, поврежденной коррозией, перед нанесением лакокрасочных покрытий. Не требует мойки обработанной поверхности. Расход преобразователя 100-130 г/м².

Состав Модификатора ржавчины:

Готовый к применению водный раствор кислотного травителя и ингибирующих добавок.

Назначение Модификатор ржавчины:

Удаляет налет ржавчины
Предотвращает подпленочную коррозию, создавая на поверхности металла пассивирующую цинк-фосфатную пленку;
Повышает адгезию лакокрасочных материалов к поверхности металла.
Купить Преобразователь для ржавчины 1 литр онлайн дешево в интернет — магазине или в офисе продаж возможно за наличный или безналичный расчет. ООО «Ватра» всегда стремиться предложить цены ниже рыночных на товары, так как является первым представителем и поставщиком многих товаров и брендов. В составе компании крупная производственная база сварочных материалов и розничная сеть строительных магазинов. На сайте shop-vatra.by Вы увидите товары, которые можно купить оптом и в розницу: все для сварки, средства индивидуальной защиты, бытовая химия, строительные материалы, хозтовары, электроинструмент и многое другое.
Осуществляем доставку товаров по Минску, Минской области, РБ (по запросу в зависимости от веса товара). Все товары можно заказать и забрать в филиалах компании по Беларуси (Барановичи и др).
С нами удобно Преобразователь для ржавчины 1 литр купить — Вы всегда останетесь довольны!
Центральный склад в г. Минск: 223016, РБ, Минская обл. , Минский район, юго-восточнее д. Новый Двор, Административно-хозяйственное здание УП «Ватра», комн.24, +375 17 508 74 87
Производитель: ОДО Сталькон г. Минск, ул. Судмалиса, 13 (почтовый адрес, адрес отгрузки)
телефон : 8(017)246-90-01

Модификатор ржавчины СФ-1

ОБЕСПЫЛИВАЮЩИЙ, ОБЕЗЖИРИВАЮЩИЙ, ФОСФАТИРУЮЩИЙ
МОДИФИКАТОР РЖАВЧИНЫ – ГРУНТ

СФ-1

ТУ-2121-002-18817747-2001

Состав внесен в ГОСТ 9.402-2004

Удостоверение о государственной гигиенической регистрации РБ № 08-33-0.286938

Применение СФ-1 позволяет:
► отказаться от трудоемкой механической зачистки металлических поверхностей;
► защитить поверхность от повторного ржавления при межоперационном хранении;
► за одну операцию произвести одновременно очистку, обезжиривание, модифицирование многофазных окисленных слоев с толщиной ржавчины до 150 мкм, грунтование.

Общая характеристика состава СФ-1 по заключениям НИИ

Состав СФ-1 — фосфатирующий модификатор ржавчины, предназначен для обработки стальных, чугунных, оцинкованных и алюминиевых поверхностей перед нанесением лакокрасочного покрытия (ЛКП). Служит для защиты металла от коррозии и преобразования ржавчины и плотносцепленной прокатной окалины в аморфную железофосфатную плёнку от серебристо – серого цвета, до черно — стального цвета.

Появившийся слой выдерживает напряжение 300-500 вольт, в определённых системах ЛКП сохраняет устойчивость от — 60°С до 600°С. При наличии блуждающих токов замедляет процесс коррозии.

Защищает активные поверхности от повторного ржавления при межоперационном хранении на открытом воздухе под навесом, при влажности воздуха не более 90%.

В системе покрытий используется как в обычных, так и в кислотных, соляных, щелочных средах.

Не нужны температурные режимы для обработки и сушки.

Состав можно наносить методом протирки (рекомендуется, для одновременного обезжиривания, обеспыливания, декапирования, фосфатирования и формирования тонкого защитного слоя), распыления (для труднодоступных мест), окунания (с барбатажем), при температуре воздуха при нанесении от -10°С до 40°С. Можно наносить на поверхность, нагретую до 175°С. Распыление проводить соблюдая меры безопасности.

Высыхание от 20 мин. (при температуре 23°С), до 14 часов (при температуре 4°С) при влажности воздуха от 60% до 80%, при более низких температурах и повышенной влажности, срок сушки увеличивается. Можно проводить сушку и при более высоких температурных режимах — до 130°С, около 3 минут. После полного высыхания состава, появившийся слой — нейтрален, (проверяется лакмусовой бумагой). Запрещаются дополнительные промывки и механические обработки поверхности перед нанесением ЛКП.

Совместим с основными лакокрасочными материалами, которые можно наносить на поверхность без предварительного грунтования.

Адгезия с металлом оценивается не более 1 балла.

Плотность фосфатного покрытия 1,28 — 4,6г/м². (рекомендуется 2,0 -2,56г/м²). Появившийся слой помогает проведению сварочных работ, улучшается качество С0₂ — сварки, а при нанесении состава на сварочный шов, защищает его от дальнейшей коррозии. Также решает проблему подготовки поверхности для кремнийорганических и порошковых покрытий, может быть использован для защиты внешних, а так же внутренних поверхностей резервуаров для нефти и светлых нефтепродуктов в комплексе с эмалями типа БЭП 61ОР, ТАНЭП.

Расход 20 / 30 гр. на м

2, что означает 1 кг состава обрабатывает в среднем 30 кв. м . поверхности в зависимости от толщины слоя ржавчины. Рекомендуется плотносцепленную ржавчину свыше 150 мкм, обрабатывать в 2 слоя, с интервалом 5-10 мин.

Окрашивать только после полного высыхания обработанной поверхности! Увеличивает срок службы лакокрасочного покрытия в 1.5-2.0 раза.

Темп. хранения от -25 до 40°С. Не горюч, не взрывоопасен. Состав готов к применению. Срок годности 3 года.

Стандартная фасовка: полиэтиленовые канистры по 10 кг, 25 кг.

Купить модификатор ржавчины СФ-1 в Новосибирске — просто! Промресурс — это официальный представитель завода по производству фосфатирующего модификатора ржавчины СФ-1! У нас Вы можете купить антиржавчину СФ-1 с доставкой по России — до ТК Ваш заказ мы доставим совершенно бесплатно! Если Вы хотите купить преобразователь ржавчины СФ-1 — позвоните нам по телефону

(383) 310-03-65, 8-913-907-5069 или оставьте заявку и мы с удовольствием Вам поможем!

Модификатор ржавчины СФ-1 (фосфатирующий состав)

для преобразования ржавчины и плотно сцепленной прокатной окалины в аморфную железофосфатную пленку

См.

также: http://www.infrahim.ru/sprav/sov/

Назначение

Фосфатирующий модификатор ржавчины СФ-1 предназначен для обработки стальных, чугунных, оцинкованных и алюминиевых поверхностей перед нанесением ЛКМ.

Особые свойства

Состав СФ-1 служит для защиты металла от коррозии, преобразует ржавчину и плотно сцепленную прокатную окалину в аморфную железофосфатную пленку от серебристо-серого до черно-стального цвета.

Образовавшийся слой выдерживает напряжение 300-500 В, в определенных системах покрытий он устойчив к действию температур от — 60 до 600 °С, при наличии блуждающих токов замедляет процесс коррозии.

Фосфатное покрытие защищает изделия от повторного ржавления при межоперационном хранении на открытом воздухе под навесом при влажности воздуха не более 90%.

Состав используется для обработки металлических поверхностей, эксплуатирующихся в нейтральных, кислотных, щелочных средах, а также солевых растворах в открытой атмосфере умеренного и тропического климата.

Проведенные ускоренные климатические испытания установили, что применение состава СФ-1 перед окраской меламиноалкидными, алкидными и эпоксидными ЛКМ позволяет получать комплексное покрытие со сроком службы 8-10 лет.

При использовании в комплексе с порошковыми ЛКМ обеспечивает такую же солестойкость покрытий, как и при применении КФ-8. В ряде случаев повышает срок службы покрытия в 2-3 раза.

Так, производимые предприятием военно-промышленного комплекса «Импульс» средства связи из оцинкованной стали, устанавливаемые в грунт, в том числе в болотистые почвы, были заменены стальными, обработанными перед окрашиванием составом СФ-1. Через 5-7 лет использования аппаратуры следов коррозии не обнаружено.

Состав СФ-1 можно наносить методом протирки (в этом случае он рекомендуется также для обезжиривания, обеспыливания и декапирования), распыления (для труднодоступных мест), окунания с барботажем при температуре воздуха от -10 до 40 °С. Модификатор ржавчины можно наносить на поверхность, нагретую до 175 °С.

Распыление проводят в специальных камерах с вытяжкой, соблюдая необходимые меры безопасности.

Время высыхания при влажности воздуха 60-80%, температуре 23 °С — не менее 20 мин, при 4 °С — до 14 ч, при более низких температурах и повышенной влажности срок сушки увеличивается.

Можно проводить сушку и при более высокой температуре, например 130 °С, около 3 мин. Образовавшийся после полного высыхания состава слой имеет нейтральную реакцию (проверяется лакмусовой бумагой).

Перед нанесением ЛКМ запрещается проведение промывки и механической обработки поверхности. Фосфатный слой совместим с основными ЛКМ, которые можно наносить на поверхность без предварительного грунтования.

Адгезия с металлом — не более 1 балла. Плотность фосфатного Пк составляет 1,28-4,6 г/м² (рекомендуется 2,0-2,56 г/м²).

Преимущества использования СФ-1 заключаются в том, что его нанесение не требует специальных методов, а для сушки не нужны особые режимы и дополнительные энергозатраты.

Применение состава позволяет отказаться от трудоемкой механической зачистки металлических поверхностей, обеспыливания, удаления маслянистых остатков.

Перед нанесением состава необходимо удалить только старое покрытие и рыхлый слой ржавчины, так как один слой СФ-1 превращает в фосфатный слой ржавчину толщиной до 150 мкм.

После преобразования ржавчины и прокатной окалины состав нейтрализуется и перестает взаимодействовать с металлом.

Появившийся слой помогает проведению сварочных работ, улучшается качество СО₂сварки, а при нанесении на сварочный шов защищает его от дальнейшей коррозии.

Модификатор СФ-1 можно также использовать при подготовке поверхности перед нанесением кремнийорганических материалов.

Расход состава — 20-30 г/м², т.е. 1 кг состава можно обработать в зависимости от толщины слоя ржавчины около 30 м² поверхности.

Для обработки плотно сцепленной ржавчины с толщиной 150 мкм рекомендуется наносить 2 слоя состава с интервалом 5-10 мин.

Окрашивать изделия можно только после полного высыхания обработанной поверхности.

Состав готов к применению (срок годности 3 года), расфасован в тару по 5 и 25 кг, СФ-1 негорюч и невзрывоопасен.

Области применения

Состав СФ-1 предназначен для применения на железнодорожном транспорте — для фосфатирования изделий и прокорродированных поверхностей железнодорожного подвижного состава и других транспортных конструкций; в нефтяной и газовой промышленности — для фосфатирования поверхностей оборудования, трубопроводов и резервуаров для хранения нефти и нефтепродуктов.

Состав внесен в Межгосударственный стандарт Евразийского совета по стандартизации, метрологии и сертификации, ГОСТ 9.402-04, отраслевой стандарт МПС, РД ОАО «ВНИИНЕФТЕМАШ», РД ГУ «НИИПХ», РД ОАО ЦКБ НПО «СУДОРЕМОНТ».

ТУ 2121-002-18817747-2001 «Состав СФ-1» согласованы с МПС РФ, ГУП «ВНИИЖТ», «ГОСГОРТЕХНАДЗОР» РФ, АО «ВНИИСТ», ОАО «ВНИИНЕФТЕМАШ», ФГУ «Российский речной регистр», ГУП «НИИМОССТРОЙ».

Состав испытан и одобрен ведущими организациями в области проведения антикоррозионных работ: ОАО «НИИ ЛКП с ОМЗ «Виктория», ГУП «ВНИИЖТ», АО «ВНИИСТ», ГУП «НИИПХ», ОАО «ВНИИНЕФТЕМАШ», ГУП «НИИМОССТРОЙ», РГУ Нефти и газа им. И.М. Губкина, ФГУП «НИИПМ», ГУП «Академия коммунального хозяйства им. К.Д. Памфилова».

Модификатор СФ разрешен к применению Госгортехнадзором РФ, признан Российским речным регистром, имеет сертификат соответствия Госстроя России.

Технические характеристики

Температура воздуха при нанесении
…………………………………………………………………………………………………………………………. от -10 °С до +40 °С

Температура наносимой поверхности
…………………………………………………………………………………………………………………………. до +175 °С

Расход
. ………………………………………………………………………………………………………………………… 20-30 г/м²

Сушка:

— при +20 °С
…………………………………………………………………………………………………………………………. 30-40 мин

— при +10 °С
…………………………………………………………………………………………………………………………. 4 часа

— при +1 °С
…………………………………………………………………………………………………………………………. 10 часов

Толщина ржавчины
…………………………………………………………………………………………………………………………. до 1 мм

Окалина
. ………………………………………………………………………………………………………………………… однородный слой с общей поверхностью

Обезжиривание
…………………………………………………………………………………………………………………………. не нужно

Обеспыливание
…………………………………………………………………………………………………………………………. не нужно

Межоперационное хранение
…………………………………………………………………………………………………………………………. в сухом помещении до 1 года

Цинкосодержание
…………………………………………………………………………………………………………………………. нет

Адгезия с ЛКМ
. ………………………………………………………………………………………………………………………… 1 балл

Стандарт

ТУ 2121-002-18817747-2001

Характеристики товара

По типу материала

Модификатор ржавчины, Прочее

По типу защищаемой поверхности

Алюминий, Цинк / Оцинковка, Черные металлы

По области применения

Железнодорожная техника, Сельскохозяйственная техника, Строительная техника, Судостроение и судоремонт , Металлоконструкции / Стальные сооружения, Здания и сооружения / Строительная отрасль, Автомобилестроение и авторемонт, Трубопроводы / Инженерные сооружения

По специальным свойствам

Антикоррозионная защита металла, Износостойкое покрытие, Окраска по ржавчине, Термостойкие ЛКМ, Авторемонтные материалы, Для наружных работ, Матовая / Полуматовая, Для внутренних работ, Быстросохнущее покрытие

По стойкости к воздействию

Влагостойкость, Износостойкость, Защита от коррозии, Стойкость к радиации, Стойкость к минеральным удобрениям, Стойкость к морской воде, Стойкость к ультрафиолетовому излучению, Термостойкость, Устойчивость к моющим средствам, Химстойкость, Атмосферостойкость, Кислотостойкость, Щелочестойкость, Солестойкость, Стойкость к агрессивным газам и парам, Маслостойкость

Купить

Преобразователь ржавчины для BlackStar

| Mr OChem

21st Century Technology

Превращает ржавчину в гладкое покрытие из полимерной смолы.

Мгновенно превращает ржавчину в твердую коррозионно-стойкую полимерную смолу.

БЕЗ ШЛИФОВКИ

БЕЗ ТРАВЛЕНИЯ

БЕЗ СТРУЙКИ

БЕЗ ШЛИФОВКИ

.. НИЧЕГО НЕ ТРЕБУЕТСЯ!

** Аэрозоли в настоящее время не подлежат бесплатной доставке. **

Обратите внимание, что отображение цвета на экране не обязательно является точным.

представляет фактический цвет продукта из-за расхождений в калибровках монитора.

Преобразователь ржавчины Black Star действует как превосходная грунтовка или прочный финишный слой. Black Star превращает всю ржавчину в гладкое, устойчивое к ржавчине защитное покрытие, которое не ржавеет повторно. Гарантированно!

Обратите внимание, что цветовые представления на экране не обязательно являются точным отображением фактического цвета продукта из-за расхождений в калибровках монитора.

Используется на нефтяных вышках в Северном море для фермеров в Хартленде. Мгновенно превращает ржавчину в твердую смолу даже в суровых погодных условиях. Black Star убьет ржавчину до смерти и защитит ваш металл от ржавчины. Гарантированно!

Обратите внимание, что цветовые представления на экране не обязательно являются точными.

представления фактического цвета продукта из-за расхождений в калибровках монитора.

Используется на ограждениях, металлических крышах, стальных навесах, зерновых бункерах, автомобилях, грузовиках, трейлерах, пристанях, зданиях, нефтяных вышках, любом металле, подверженном воздействию элементов или агрессивных химикатов, таких как удобрения или каменная соль.Буквально сотни применений !!

Обратите внимание, что цветовые представления на экране не обязательно являются точными.

представления фактического цвета продукта из-за расхождений в калибровках монитора.

Какое покрытие на галлон?

Каждый галлон покрывает приблизительно 400-500 квадратных футов. Покрытие будет зависеть от количества ржавчины, типа металла и т. Д.

Какова процедура подготовки поверхности?

Шланг или механическая смывка с грязи и мусора. Позволяют сушить. Затем нанесите Black Star распылителем, кистью, валиком или даже просто тряпкой. Некоторые пользователи окунают ржавые детали для полного погружения.

Поверхность станет черной через 20 минут после нанесения BlackStar.

Это когда ржавчина превращается в инертное полимерное покрытие, которое связывается с металлом. После высыхания можно оставить как есть или закрасить любым понравившимся цветом.

Вопросы по применению? Позвоните нам по телефону 800-788-9195, и специалист по продукту проведет вас через приложение.

Все направления указаны на этикетке.

** БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА ТОЛЬКО В 48 ШТАТАХ, АЛАСКА И ГАВАИ БУДУТ ОПЛАТИТЬ ДОПОЛНИТЕЛЬНО НА ОСНОВЕ ЦЕНЫ И ХАРАКТЕРИСТИК ДОСТАВКИ UPS **

Звоните 800-788-9195, чтобы узнать оптовые цены на бочки объемом 55 галлонов и размеры контейнеров!

Часто задаваемые вопросы

Каково покрытие на галлон?

Что такое процедура подготовки поверхности?

Шланг или механическая смывка с грязи и мусора. Позволяют сушить. Затем нанесите Black Star распылителем, кистью, валиком или даже просто тряпкой. Это так просто!

Имеет ли значение, какой у меня металл?

Нет, совсем нет. Black Star преобразует ржавчину на стали, железе, гальванике, гофре и многих других металлах. Black Star одинаково хорошо работает на плоских и наклонных поверхностях, а также на гайках, болтах, шурупах, сварных швах и инструментах!

Если у меня возникнут вопросы по заявке, кому мне позвонить?

Позвоните по телефону 800-788-9195, и один из наших знающих специалистов по продукции поможет вам.

Какую гарантию вы предоставляете?

Мы предоставляем 30-дневную гарантию возврата денег.

Ознакомьтесь с некоторыми из наших замечательных отзывов!

«Ничего себе, поверхность гладкая, как лед, гладкая, как дуло ружья!» — Билли Ф.

«Мой бункер для удобрений выглядит совершенно новым. Отличная работа!» — Майк С.

«1000 футов забора теперь свободны от ржавчины! Ребята, РОК !! Спасибо!» — Мэг Т.

«Мой старый трактор как новенький, и на этот раз я покрасил его в красный цвет.Фантастический продукт »- Пол Д.

« Мой трейлер выглядит великолепно — больше нет ржавчины! »- Ричард Л.

« Я снова использую все свои ржавые инструменты. НЕТ РЖАВНИ, этот материал работает БЫСТРО! »- Уолт Ф.

« Купил дешевую ржавую деталь, затем применил средство для удаления ржавчины Black Star — сэкономил мне кучу денег. Спасибо »- Томми Б.

« Моя старинная машина выглядит великолепно. Продукт ТОЧНО соответствует описанию. «- Сал Г.

» Здесь, в Северном море, коррозия — постоянная проблема, требующая времени, денег и труда.Black Star сэкономила нам десятки тысяч на наших морских буровых и береговых объектах ». — Джеймс Т. BP Petro

Позвоните сейчас, чтобы поговорить с одним из наших специалистов по продукции !!

800-788-9195

Устойчивость к стеблевой ржавчине пшеницы подавляется субъединицей комплекса медиатора

Shewry, PR Wheat. J. Exp. Biol. 60 , 1537–1553 (2009).

CAS Google Scholar

Билджич, Х., Хакки, Э. Э., Пандей, А., Хан, М. К. и Аккая, М. С. Древняя ДНК из 8400-летней пшеницы Чатал-Хююк: значение для происхождения неолитического сельского хозяйства. PLoS One 11 , e0151974 (2016).

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

Huang, S. et al. Гены, кодирующие пластидную ацетил-КоА-карбоксилазу и 3-фосфоглицераткиназу комплекса Triticum / Aegilops, и история эволюции полиплоидной пшеницы. Proc. Natl Acad. Sci. США 99 , 8133–8138 (2002).

ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

Marcussen, T. et al. Древние гибридизации геномов предков мягкой пшеницы. Наука 345 , 1250092 (2014).

PubMed Статья CAS PubMed Central Google Scholar

Chalupska, D. et al. Acc homoeoloci и эволюция геномов пшеницы. Proc. Natl Acad. Sci. США 105 , 9691–9696 (2008).

ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

Петурсон Б. Эпидемии ржавчины пшеницы в западной Канаде в 1953, 1954 и 1955 годах. Can. J. Plant Sci. 38 , 16–28 (1958).

Артикул Google Scholar

Olivera, P. et al. Фенотипическая и генотипическая характеристика расы TKTTF Puccinia graminis f. sp. tritici , который вызвал эпидемию стеблевой ржавчины пшеницы в Южной Эфиопии в 2013-14 гг. Фитопатология 105 , 917–928 (2015).

PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

Olivera, P. D. et al. Расы Puccinia graminis f. sp. tritici с комбинированной вирулентностью к Sr13 и Sr9e в питомнике по скринингу стеблевой ржавчины в Эфиопии. Plant Dis. 96 , 623–628 (2012).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

Pretorius, Z. A., Singh, R. P., Wagoire, W. W. & Payne, T. S. Обнаружение вирулентности гена устойчивости к стеблевой ржавчине пшеницы Sr31 в Puccinia graminis f. sp. tritici в Уганде. Plant Dis. 84 , 203 (2000).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

10.

Stakman E.C., Stewart D. M. & Loegering W. Q. Идентификация физиологических рас Puccinia graminis var. tritici . (Служба сельскохозяйственных исследований Министерства сельского хозяйства США, Вашингтон, 1962 г.).

11.

Бай Д. и Кнотт Д. Р. Подавление устойчивости к ржавчине мягкой пшеницы ( Triticum aestivum L.) с помощью хромосом D-генома. Геном 35 , 276–282 (1992).

Артикул Google Scholar

12.

Liu, W. et al. Разработка и характеристика компенсирующей транслокации пшеницы Thinopyrum intermedium Робертсона с устойчивостью Sr44 к стеблевой ржавчине (Ug99). Теор. Прил. Genet. 126 , 1167–1177 (2013).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

13.

The, T. & Baker, E.P. Основные исследования, связанные с переносом генетических признаков от Triticum monococcum L.к гексаплоидной пшенице. Aust. J. Biol. Sci. 28 , 189–199 (1975).

Артикул Google Scholar

14.

Иннес, Р. Л. и Кербер, Э. Р. Устойчивость к листовой и стеблевой ржавчине пшеницы у Triticum tauschii и наследование у гексаплоидной пшеницы устойчивости, переданной от T. tauschii . Геном 37 , 813–822 (1994).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

15.

Нельсон, Дж. К., Сингх, Р. П., Аутрик, Дж. Э. и Сорреллс, М. Е. Картирование генов, обеспечивающих и подавляющих устойчивость к листовой ржавчине у пшеницы. Crop Sci. 37 , 1928–1935 (1997).

CAS Статья Google Scholar

16.

Kema, G.H.J., Lange, W. & van Silfhout, C.H. Дифференциальное подавление устойчивости к полосатой ржавчине у синтетических гексаплоидов пшеницы, полученных из Triticum turgidum subsp. dicoccoides и Aegilops squarrosa . Фитопатология 85 , 508–512 (1995).

Артикул Google Scholar

17.

Hanušová, R., Hsam, SLK, Bartoš, P. & Zeller, FJ Подавление гена устойчивости к мучнистой росе Pm8 в сортах Triticum aestivum L. (мягкая пшеница), несущих транслокации пшеница-рожь T1BL .1RS. Наследственность 77 , 383–387 (1996).

Артикул Google Scholar

18.

Рен С. X., Макинтош Р. А. и Лу З. Дж. Генетическое подавление гена Pm8 , полученного из зерновой ржи, в пшенице. Euphytica 93 , 353–360 (1997).

Артикул Google Scholar

19.

Assefa, S. & Fehrmann, H. Устойчивость к листовой ржавчине пшеницы у Aegilops tauschii Coss.и наследование устойчивости гексаплоидной пшеницы. Genet. Ресурс. Обрезать. Evol. 47 , 135–140 (2000).

Артикул Google Scholar

20.

Assefa, S. & Fehrmann, H. Оценка Aegilops tauschii Coss. на устойчивость к стеблевой ржавчине пшеницы и наследование генов устойчивости у гексаплоидной пшеницы. Genet. Ресурс. Crop Evol. 51 , 663–669 (2004).

CAS Статья Google Scholar

21.

Чен В., Лю Т. и Гао Л. Подавление устойчивости к полосатой и листовой ржавчине при межвидовых кроссах пшеницы. Euphytica 192 , 339–346 (2013).

CAS Статья Google Scholar

22.

Вульф Б. Б. и Москоу М. Дж. Стратегии передачи устойчивости пшенице: от широких кроссов к кассетам ГМ. Фронт. Plant Sci. 5 , 692 (2014).

PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

23.

Кербер, Э. Р. и Грин, Г. Дж. Подавление устойчивости к стеблевой ржавчине у гексаплоидной пшеницы сорта. Canthatch по хромосоме 7DL. банка. J. Bot. 58 , 1347–1350 (1980).

Артикул Google Scholar

24.

Кербер, Э. Р. Пшеница: восстановление тетраплоидного компонента (AABB) гексаплоидов. Наука 143 , 253–255 (1964).

ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

25.

Кербер, Э. Р. Устойчивость к стеблевой ржавчине у гексаплоидной пшеницы «Canthatch», индуцированная мутацией, не являющейся супрессором хромосомы 7DL. Геном 34 , 935–939 (1991).

Артикул Google Scholar

26.

Уильямс, Н. Д., Миллер, Дж. Д. и Клиндворт, Д. Л. Индуцированные мутации генетического супрессора устойчивости к стеблевой ржавчине пшеницы. Crop Sci. 32 , 612–616 (1992).

Артикул Google Scholar

27.

Международный консорциум по секвенированию генома пшеницы. Черновая последовательность на основе хромосом генома гексаплоидной мягкой пшеницы ( Triticum aestivum ). Наука 345 , 1251788 (2014).

Артикул CAS Google Scholar

28.

Sánchez-Martín, J. et al. Быстрая изоляция генов ячменя и пшеницы путем секвенирования мутантных хромосом. Genome Biol. 17 , 221 (2016).

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

29.

Allen, A. M. et al. Обнаружение транскрипт-специфического однонуклеотидного полиморфизма и анализ сцепления в гексаплоидной мягкой пшенице ( Triticum aestivum L.). Plant Biotechnol. J. 9 , 1086–1099 (2011).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

30.

Международное секвенирование генома пшеницы C. et al. Сдвиг границ в исследованиях и селекции пшеницы с использованием полностью аннотированного эталонного генома. Наука 361 , eaar7191 (2018).

Артикул CAS Google Scholar

31.

Mathur, S., Vyas, S., Kapoor, S. & Tyagi, AK. Медиаторный комплекс в растениях: структура, филогения и профили экспрессии репрезентативных генов у двудольных (Arabidopsis) и однодольных ( рис) при размножении и абиотическом стрессе. Plant Physiol. 157 , 1609–1627 (2011).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

32.

Canet, J. V., Dobón, A. & Tornero, P. Непризнание BTh5, гомолога медиаторной субъединицы Arabidopsis , необходимо для развития и ответа на салициловую кислоту. Растительная клетка 24 , 4220–4235 (2012).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

33.

Hurni, S. et al. Ген устойчивости к мучнистой росе Pm8 , полученный из ржи, подавляется его ортологом из пшеницы. Plant J. 79 , 904–913 (2014).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

34.

Flanagan, P. M. et al. Разрешение факторов, необходимых для инициации транскрипции дрожжевой РНК-полимеразой II. J. Biol. Chem. 265 , 11105–11107 (1990).

CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

35.

Ким, Ю. Дж., Бьорклунд, С., Ли, Ю., Сэйр, М. Х. и Корнберг, Р. Д. Мультибелковый медиатор активации транскрипции и его взаимодействие с С-концевым повторяющимся доменом РНК-полимеразы II. Cell 77 , 599–608 (1994).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

36.

Backstrom, S., Elfving, N., Nilsson, R., Wingsle, G. & Bjorklund, S. Очистка растительного медиатора из Arabidopsis thaliana идентифицирует PFT1 как субъединицу Med25. Мол. Ячейка 26 , 717–729 (2007).

PubMed Статья CAS PubMed Central Google Scholar

37.

Бурбон, Х. М. Сравнительная геномика подтверждает глубокое эволюционное происхождение большого четырехмодульного комплекса медиатора транскрипции. Nucleic Acids Res. 36 , 3993–4008 (2008).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

38.

Бьорклунд, С. и Густафссон, К. М. Медиаторный комплекс дрожжей и его регуляция. Trends Biochem. Sci. 30 , 240–244 (2005).

PubMed Статья CAS PubMed Central Google Scholar

39.

Конавей, Р. К., Сато, С., Томомори-Сато, К., Яо, Т. и Конавей, Дж. У. Медиаторный комплекс млекопитающих и его роль в регуляции транскрипции. Trends Biochem. Sci. 30 , 250–255 (2005).

CAS PubMed Статья Google Scholar

40.

Корнберг Р. Д. Медиатор и механизм активации транскрипции. Trends Biochem. Sci. 30 , 235–239 (2005).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

41.

An, C. & Mou, Z. Функция комплекса медиатора в иммунитете растений. Завод Сигнал. Behav. 8 , e23182 (2013).

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

42.

Caillaud, M.C. et al. Эффектор ложной мучнистой росы ослабляет иммунитет, вызванный салициловой кислотой, у Arabidopsis, взаимодействуя с комплексом медиатора хозяина. PLoS Biol. 11 , e1001732 (2013).

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

43.

Zhang, X., Yao, J., Zhang, Y., Sun, Y. & Mou, Z. Субъединицы MED14 / SWP и MED16 / SFR6 / IEN1 комплекса медиаторов Arabidopsis по-разному регулируют экспрессию защитных генов в иммунных ответах растений. Plant J. 75 , 484–497 (2013).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

44.

Wang, C., Du, X. & Mou, Z. Субъединицы медиаторного комплекса MED14, MED15 и MED16 участвуют в перекрестной передаче защитных сигналов у Arabidopsis. Фронт. Plant Sci. 7 , 1947 (2016).

PubMed PubMed Central Google Scholar

45.

Wathugala, D. L. et al. Медиаторная субъединица SFR6 / MED16 контролирует экспрессию защитных генов, опосредованную салициловой кислотой и жасмонатными реактивными путями. New Phytol. 195 , 217–230 (2012).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

46.

Zhang, X., Wang, C., Zhang, Y., Sun, Y. & Mou, Z. Субъединица 16 медиаторного комплекса Arabidopsis положительно регулирует опосредованную салицилатом системную приобретенную резистентность и пути защиты, индуцированные жасмонатом / этиленом. Растительная клетка 24 , 4294–4309 (2012).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

47.

Balamotis, M. A. et al. Сложность контроля транскрипции на интерфейсе активационный домен-посредник. Sci. Сигнал. 2 , ra20 (2009).

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

48.

Dixon, J. R. et al. Топологические домены в геномах млекопитающих, идентифицированные с помощью анализа взаимодействий хроматина. Nature 485 , 376–380 (2012).

ADS CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

49.

Аллен Б. Л. и Таатес Д. Дж. Медиаторный комплекс: центральный интегратор транскрипции. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 16 , 155–166 (2015).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

50.

Thomas, J., Chen, Q. & Howes, N. Удвоение хромосом гаплоидов мягкой пшеницы с кофеином. Геном 40 , 552–558 (1997).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

51.

Бенджамини Ю. и Хохберг Ю. Контроль уровня ложных открытий: практичный и эффективный подход к множественному тестированию. J. R. Stat. Soc. Сер. B 57 , 289–300 (1995).

MathSciNet МАТЕМАТИКА Google Scholar

52.

Джин Ю. Обнаружение вирулентности к гену устойчивости Sr24 внутри расы ТТКС Puccinia graminis f. sp. tritici . Plant Dis. 92 , 923–926 (2008).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

53.

Roelfs, A. P. & Martens, J. W. Внутренняя система номенклатуры Puccinia graminis f. sp. tritici . Фитопатология 78 , 526–533 (1988).

Артикул Google Scholar

54.

Jin, Y. et al. Характеристика типов инфекции проростков и инфекционных ответов взрослых растений моногенных генных линий Sr на расу TTKS Puccinia graminis f.sp. tritici . Plant Dis. 91 , 1096–1099 (2007).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

55.

Макинтош, Р. А., Веллингс, К. Р. и Парк, Р. Ф. Ржавчина пшеницы — Атлас генов устойчивости . (Публикации CSIRO, 1995).

56.

Newcomb, M. et al. Кенийские изоляты Puccinia graminis f. sp. tritici с 2008 по 2014 г .: вирулентность по отношению к SrTmp в группе расы Ug99 и последствия для программ разведения. Фитопатология 106 , 729–736 (2016).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

57.

Hiebert, C. W. et al. Генетика и картирование устойчивости проростков к стеблевой ржавчине Ug99 канадских сортов пшеницы «Peace» и «AC Cadillac». Теор. Прил. Genet. 122 , 143–149 (2011).

PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

58.

Петерсон, Р. Ф., Кэмпбелл, А. Б. и Ханна, А. Е. Диаграммная шкала для оценки интенсивности ржавчины на листьях и стеблях злаков. банка. J. Res. 26 , 496–500 (1948).

Артикул Google Scholar

59.

Vrána, J. et al. Поточная сортировка митотических хромосом мягкой пшеницы ( Triticum aestivum L.). Генетика 156 , 2033–2041 (2000).

PubMed PubMed Central Google Scholar

60.

Giorgi, D. et al. FISHIS: флуоресцентная гибридизация in situ в суспензии и сортировка по потоку хромосом — это просто. PLoS One 8 , e57994 (2013).

ADS CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

61.

Kubaláková, M. et al. Анализ и сортировка хромосом ржи ( Secale cereale L.) с помощью проточной цитометрии. Геном 46 , 893–905 (2003).

PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

62.

Šimková, H. et al. Связывание амплифицированной ДНК из хромосом, отсортированных по потоку, с картированием SNP с высокой плотностью ячменя. BMC Genomics 9 , 294 (2008).

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

63.

Bolger, A. M., Lohse, M. & Usadel, B.Trimmomatic: гибкий триммер для данных последовательности Illumina. Биоинформатика 30 , 2114–2120 (2014).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

64.

Эрнандес, Д., Франсуа, П., Фаринелли, Л., Остерас, М. и Шренцель, Дж. De novo секвенирование бактериального генома: миллионы очень коротких считываний, собранные на настольном компьютере. Genome Res. 18 , 802–809 (2008).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

65.

Hernandez, D. et al. De novo завершил сборку генома 2,8 Мбит / с Staphylococcus aureus из коротких и длинных парных считываний 100 п.н. Биоинформатика 30 , 40–49 (2014).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

66.

Смит А.Ф., Хабли Р. и Грин П. RepeatMasker Open-4.0. http://repeatmasker.org (2013–2015).

67.

Koboldt, D.C. et al. VarScan 2: открытие соматических мутаций и изменения числа копий при раке путем секвенирования экзома. Genome Res. 22 , 568–576 (2012).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

68.

Kim, D. et al. TopHat2: точное выравнивание транскриптомов при наличии вставок, делеций и слияний генов. Genome Biol. 14 , R36 (2013).

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

69.

Trapnell, C. et al. Сборка и количественное определение транскриптов с помощью RNA-Seq выявляет неаннотированные транскрипты и переключение изоформ во время дифференцировки клеток. Nat. Biotechnol. 28 , 511–515 (2010).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

70.

Haas, B.J. et al. Реконструкция последовательности транскрипта de novo из RNA-seq с использованием платформы Trinity для создания и анализа ссылок. Nat. Protoc. 8 , 1494–1512 (2013).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

71.

Lorieux, M. MapDisto: быстрое и эффективное вычисление карт генетического сцепления. Мол. Порода. 30 , 1231–1235 (2012).

CAS Статья Google Scholar

72.

Косамби, Д. Д. Оценка расстояний карты от значений рекомбинации. Ann. Евгений. 12 , 172–175 (1943).

Артикул Google Scholar

73.

Wang, S. et al. Характеристика полиплоидного геномного разнообразия пшеницы с использованием массива однонуклеотидных полиморфизмов высокой плотности 90,000. Plant Biotechnol. J. 12 , 787–796 (2014).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

74.

Ахунов Э.Д. и др. Карты нуклеотидного разнообразия показывают различия в разнообразии геномов и хромосом пшеницы. BMC Genomics 11 , 702 (2010).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

75.

Finn, R. D. et al. InterPro в аннотациях к семейству белков и доменам, выходящим за рамки 2017 года. Nucleic Acids Res. 45 , D190 – D199 (2017).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

76.

Jones, P. et al. InterProScan 5: классификация функций белков в масштабе генома. Биоинформатика 30 , 1236–1240 (2014).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

77.

Келли, Л. А., Мезулис, С., Йейтс, К. М., Васс, М. Н. и Стернберг, М. Дж. Веб-портал Phyre2 для моделирования, прогнозирования и анализа белков. Nat. Protoc. 10 , 845–858 (2015).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

78.

Лупас, А., Ван Дайк, М. и Сток, Дж. Предсказание спиральных спиралей на основе белковых последовательностей. Science 252 , 1162–1164 (1991).

ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

79.

Delorenzi, M. & Speed, T. Модель HMM для областей coiled-coil и сравнение с прогнозами на основе PSSM. Биоинформатика 18 , 617–625 (2002).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

80.

Грубер М., Содинг Дж. И Лупас А. Н. REPPER-повторы и их периодичность в волокнистых белках. Nucleic Acids Res. 33 , W239 – W243 (2005).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

81.

Mascher, M. et al. Конформация хромосомы фиксирует упорядоченную последовательность генома ячменя. Nature 544 , 427–433 (2017).

ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

82.

Grønvold, L., Schubert, M., Sandve, S. R., Fjellheim, S. & Hvidsten, T. R. Сравнительная транскриптомика дает представление об эволюции холодовой реакции у Pooideae. bioRxiv (2017).

83.

Liu, J., Zhou, Y., Luo, C., Xiang, Y. & An, L. Секвенирование транскриптома De novo проростков пустынных трав Achnatherum splendens (Achnatherum) и определение солеустойчивости гены. Гены 7 , E12 (2016).

PubMed Статья CAS PubMed Central Google Scholar

84.

Grabherr, M. G. et al. Сборка полноразмерного транскриптома из данных RNA-Seq без эталонного генома. Nat. Biotechnol. 29 , 644–652 (2011).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

85.

Löytynoja, A. Филогенетическое выравнивание с PRANK. Methods Mol. Биол. 1079 , 155–170 (2014).

PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

86.

Stamatakis, A. RAxML версия 8: инструмент для филогенетического анализа и постанализа крупных филогений. Биоинформатика 30 , 1312–1313 (2014).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

87.

Meharg, C. et al. Направленный на признаки de novo популяционный транскриптом анализирует генетическую регуляцию сбалансированного полиморфизма фосфорного питания / толерантности к арсенату у дикой травы, Holcus lanatus . New Phytol. 201 , 144–154 (2014).

CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

88.

Янг, З. PAML 4: филогенетический анализ методом максимального правдоподобия. Мол. Биол. Evol. 24 , 1586–1591 (2007).

CAS Статья Google Scholar

89.

Dawson, A. M. et al. Выделение и точное картирование Rps6 : промежуточного гена устойчивости хозяина ячменя к полосатой ржавчине пшеницы. Теор. Прил. Genet. 129 , 831–843 (2016).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

90.

Лав, М. И., Хубер, В. и Андерс, С. Умеренная оценка кратного изменения и дисперсии данных РНК-seq с помощью DESeq2. Genome Biol. 15 , 550 (2014).

PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

91.

Huber, W. et al. Организация высокопроизводительного геномного анализа с помощью биокондуктора. Nat. Методы 12 , 115–121 (2015).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

92.

Стори, Дж. Д. и Тибширани, Р. Статистическая значимость для полногеномных исследований. Proc. Natl Acad. Sci. США 100 , 9440–9445 (2003).

ADS MathSciNet CAS PubMed МАТЕМАТИКА Статья PubMed Central Google Scholar

93.

Parker, D. et al. Фосфорилирование CREB по Ser-133 индуцирует образование комплекса с CREB-связывающим белком по прямому механизму. Мол. Cell Biol. 16 , 694–703 (1996).

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться у системного администратора.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Профилирование модификаций гистонов (h4K9me2 и h5K12ac) по всему геному и экспрессия генов в ржавчине (Uromyces appendiculatus) Зараженная фасоль обыкновенная (Phaseolus vulgaris L.) В.Р., Смолинский Т.Г. и др. (2015) Полногеномное профилирование модификаций гистонов (h4K9

_me2 и h5K12 _ac) и экспрессия генов в ржавчине ( Uromyces appendiculatus ) Инокулированная фасоль обыкновенная ( Phaseolus vulgaris L.). PLoS ONE 10 (7): e0132176. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132176

Редактор: Роберто Мантовани, Миланский университет, ИТАЛИЯ

Поступила: 13 февраля 2015 г .; Принято: 10 июня 2015 г .; Опубликовано: 13 июля 2015 г.

Авторские права: © 2015 Ayyappan et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

Доступность данных: Все соответствующие анализы находятся в пределах рукопись и файлы вспомогательной информации к ней.Данные доступны на сайте Национального центра биотехнологической информации под номером биопроекта PRJNA280864.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантом USDA на наращивание потенциала 2008-38814-04735 для ВК, грантом USDA на наращивание потенциала 2010-38821-21540 для MM и VK и грантом EPSCoR штата Делавэр из гранта Национального научного фонда EPS-0814251 и Частично штат Делавэр в ВК.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Растения — это сидячие организмы, которые не могут физически переместиться, чтобы избежать неблагоприятных условий окружающей среды, и разработали сложные защитные механизмы для ответа на биотические и абиотические стрессы. Молекулярные механизмы индуцированных стрессом сигнальных путей и генов различаются в зависимости от различных стрессов, таких как атака патогенов, холод, жара, засуха и соленость [1, 2]. Однако есть подтверждающие доказательства перекрестной связи между сигнальными путями, которые отвечают на биотические и абиотические стрессы [3].Патогенетический стресс — один из самых сложных и разрушительных стрессов, наблюдаемых у растений [4]. Иммунитет, запускаемый паттерном (PTI), активируется у растений как ранний защитный ответ [5], и сообщается о роли генов, связанных с защитой, включая гены, модифицирующие клеточную стенку [6].

Сообщается о значительных потерях урожая сельскохозяйственных культур, таких как фасоль, из-за биотических (62%) и абиотических (37–67%) стрессов [7]. Бобовая ржавчина, заболевание, вызываемое грибковым патогеном Uromyces appendiculatus , представляет собой серьезную проблему для выращивания фасоли во всем мире [8].Тропические и субтропические районы мира больше всего пострадали от эпидемии этого заболевания. Разнообразие вирулентности U . Сообщалось о appendiculatus во многих географических регионах [9–11]. Высокая генетическая изменчивость ржавчины является важной проблемой, которая продолжает затруднять создание устойчивых устойчивых сортов фасоли обыкновенной. Комплексный молекулярно-генетический и геномный анализ защитных путей и генов поможет раскрыть основные механизмы устойчивости к болезням, что, в свою очередь, поможет в развитии более широкой и устойчивой устойчивости у обычных сортов фасоли, обеспечивая при этом более полное понимание устойчивости растений к болезням. Генеральная.

Эпигенетическая и эпигеномная регуляция, включая модификации гистонов и хроматина, может модулировать реакции на стресс, активируя или подавляя транскрипцию, координируя «открытые» или «закрытые» конформации хроматина соответственно [12]. В некоторых случаях изменения хроматина устойчивы и автономны в результате наследственных эпиаллелей, которые вызывают фенотипические изменения [13]. Эпигенетические модификации могут быть вызваны длительным воздействием патогенов, что приводит к стабильным эпигенетическим характеристикам устойчивости или толерантности [14].Было показано, что изменения в метках модификации гистонов влияют на механизмы регуляции генов в Arabidopsis thaliana [15]. Разнообразие экспрессии генов как на тканеспецифическом, так и на популяционном уровнях отражается в изменении метилирования ДНК [4]. Определение роли транскрипционных сетей не только полезно для понимания молекулярных механизмов ответов растений на устойчивость к биотическим и абиотическим стрессам, но также полезно для улучшения устойчивости к стрессам с помощью генной инженерии.Предыдущие исследования показали, что модификации гистонов участвуют в абиотических [16, 17] и биотических ответах [18, 19]. У трансгенного Arabidopsis сверхэкспрессия гистондеацетилазы, AtHD2C приводила к нечувствительности к абсцизовой кислоте (ABA) и проявляла устойчивость к солевому стрессу и засухе [20]. Гистон-ацетилтрансфераза1-зависимая эпигенетическая метка, участвующая в управляемом паттерном иммунитете (PTI) против Pseudomonas syringae , описана в Arabidopsis [18].При биотических и абиотических стрессах растения регулируют экспрессию генов в координации с несколькими белками или факторами транскрипции (TF) [21]. Факторы транскрипции повышают или понижают экспрессию чувствительных к стрессу генов независимо или путем привлечения других ассоциированных белков [22].

Значительный успех был достигнут в создании устойчивых к стрессу сортов за счет использования традиционных методик селекции растений [23]. Совсем недавно технологии секвенирования следующего поколения (NGS) были использованы для лучшего понимания защитных генов, белков и регуляторных элементов, участвующих в различных метаболических путях у растений, таких как Arabidopsis [24], рис [25], горох [26]. и фасоль [27].Во время стресса растения защищаются, модулируя экспрессию генов в масштабе всего генома, связанных с различными физиологическими функциями [28]. Такие исследования экспрессии и регуляции в масштабе всего генома стали возможными с появлением высокопроизводительных технологий, включая ChIP-Seq и RNA-Seq. Из-за чувствительности и специфичности технологии ChIP-Seq для идентификации взаимодействий белок-ДНК, она была использована для создания эпигеномных карт высокого разрешения у растений, включая Arabidopsis [29], рис [30] и кукурузу [31].ChIP-Seq широко используется в геномах крупных млекопитающих для картирования in vivo сайтов связывания с транскрипционным фактором (TF) [32] и гистоновых меток [33]. RNA-Seq также широко используется для анализа экспрессии генов в масштабе всего генома, включая кодирующие и некодирующие РНК, как показано во многих исследованиях [34–36]. RNA-Seq обеспечивает всесторонний анализ сверхэкспрессированных и недоэкспрессированных генов с минимальной систематической ошибкой по сравнению с анализом микрочипов [37]. Кроме того, анализ RNA-Seq был успешно использован для анализа экспрессии генов из разных органов при различных условиях обработки у растений и для идентификации гомологов генов [27, 38].Также имеется множество отчетов об анализе транскриптомов растений в ответ на биотические [38] и абиотические стрессы [39]. Однако до сих пор нет исчерпывающих отчетов о понимании экспрессии генов и регуляции общих взаимодействий между бобами и ржавчиной в сочетании с модификациями гистонов или ДНК. Таким образом, данное исследование направлено на понимание эпигеномных и транскриптомных изменений в фасоли обыкновенной, зараженной грибковой ржавчиной, U . appendiculatus с использованием ChIP-Seq и RNA-Seq.

Результаты и обсуждение листья сорта «Сьерра», устойчивого к ржавчине. Эксперимент включал три биологические повторы, собранные в трех разных временных точках (0, 12 и 84 часа после инокуляции, hai) и в двух условиях обработки (инокулированный ржавчиной, I и имитационный инокулированный, MI).Библиотеки, использованные в этом исследовании, были обозначены как 0I, 0MI, 12I, 12MI, 84I и 84MI (таблица 1). Кроме того, тот же экспериментальный материал был использован для создания библиотек ChIP-Seq и RNA-Seq и секвенирован на платформе Illumina / HiSeq-2500, чтобы понять значимые взаимосвязи между связыванием гистонов с ДНК по всему геному и регуляцией экспрессии генов.

Сбор и предварительная обработка данных

Всего мы сгенерировали 54 библиотеки для проведения анализов RNA-Seq и ChIP-Seq в обычном компоненте.Для анализа РНК-Seq было приготовлено 18 библиотек из образцов листьев, собранных из трех биологических повторов, двух условий обработки (инокулированный и имитационный) и трех временных точек сбора после инокуляции (3 биологических повтора x 2 условия обработки x 3 точки времени сбора после лечения = 18). Аналогичным образом, в анализе ChIP-Seq для каждой гистоновой метки (h4K9 _me2 и h5K12 _ac) каждая из 18 библиотек была приготовлена точно из одного и того же источника образца, который использовался в анализе RNA-Seq для поддержания однородных экспериментальных условий, таким образом, в результате получили 36 библиотек ChIP-Seq с двумя гистоновыми метками, h4K9 _me2 и h5K12 _ac.Более того, в этом исследовании образцы с имитацией инокуляции (MI) служили фоном (аналогично отсутствию антител в других исследованиях) против инокулированных образцов, которые использовались для сравнения во время анализа ChIP-Seq для выявления дифференциально маркированных областей. Глубокое секвенирование 54 библиотек в обычном бобе привело к чтению Illumina ~ 933 млн — 50 п.н. (Таблица 1). Из них ~ 469 миллионов чтений были из RNA-Seq, а остальные (~ 464 миллиона чтений) были из ChIP-Seq. В пределах считывания ChIP-Seq ~ 271 и ~ 193 миллиона считываний были получены из меток гистонов h4K9 _me2 (метилирование) и h5K12 _ac (ацетилирование) соответственно.Относительно меньшее количество чтений в ChIP-Seq по сравнению с RNA-Seq связано с ограниченной специфичностью связывания ацетилированного и метилированного гистона в геноме. Необработанные считывания, полученные из ChIP-Seq и RNA-Seq, были обрезаны, отфильтрованы, и собранные таким образом высококачественные считывания были сопоставлены с P . vulgaris Геном G19833 (V1.0, по состоянию на 07 августа 2012 г.) из Phytozome [40]. Более 75% считываний ChIP-Seq и> 95% считываний RNA-Seq были сопоставлены с эталонным геномом, и только однозначно сопоставленные считывания с ≤ 2 несовпадениями в дальнейшем использовались в анализе.Детали анализа ChIP-Seq и RNA-Seq со статистикой картирования представлены в таблице 1.

Гистоновые метки, идентифицированные при обычном взаимодействии бобов и ржавчины

В анализе ChIP-Seq вызов пиков очень важен, и в этом исследовании использовалась пространственная кластеризация для идентификации областей, обогащенных ChIP (SICER) [41], чтобы идентифицировать 14,857, 12,521 и 12,448 пиков для h4K9 _me2 и 12,426, 11,205 и 11724 пика для h5K12 _ac при сравнении 0I, 12I и 84I с их соответствующими фонами, 0MI, 12MI и 84MI (рис. 1).Также мы сравнили количество регионов, которые были размечены по-разному между этими временными точками (0, 12 и 84 га) независимо от двух модификаций гистонов. Большинство дифференциально маркированных областей были представлены по крайней мере в двух из трех исследуемых повторов. Для метки метилирования (h4K9 _me2) мы идентифицировали 3100 (12Ivs0I), 838 (84Ivs0I) и 2603 (84Ivs12I) дифференциально маркированных областей между временными точками, соответственно (рис. 1A). Для метки ацетилирования (h5K12 _ac) дифференциально отмеченные области (пики), идентифицированные между периодами времени, включают: 1757 (12Ivs0I), 1714 (84Ivs0I) и 808 (84Ivs12I) (рис. 1B).Количество идентифицированных пиков было меньше между временными точками по сравнению с фоном, что предполагает специфичность пиков для каждой точки обработки.

Рис. 1. Идентификация участков (A) h4K9 _me2 и (B) h5K12 _ac в имитированных и инокулированных фасоли обыкновенной.

Количество пиков на 0, 12 и 84 hai сравнивалось с их соответствующими фонами, 0MI, 12MI и 84MI. Пики также сравнивали между 12Ivs0I, 84Ivs0I и 84Ivs12I с двумя модификациями гистонов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132176.g001

Наша следующая цель состояла в том, чтобы определить природу областей, связанных с дифференциально отмеченными пиками в геноме как для h4K9 _me2, так и для h5K12 _ac. марок. Мы использовали Hypergeometric Optimization of Motif EnRichment (HOMER) [42] для аннотирования пиков в: экзон, интрон, промотор, сайты терминации транскрипции (TTS) и межгенные области на основе аннотации известных генов.Мы рассматривали пик как «генный», только если он находится между начальной и конечной позицией гена, который включает 5 ’и 3’ UTR, но не промоторные области, в то время как область между двумя генами рассматривается как межгенная область. Однако центр положения пика в первую очередь определяет характер пика. В основном наша аннотация включала «промотор-TSS» как область от -1 КБ до + 100 пар оснований и «TTS» как область от -100 пар оснований до +1 КБ, в то время как интроны, экзоны и межгенные области использовались непосредственно из информации аннотации.В нашем исследовании больше пиков (> 70%) было идентифицировано в межгенных регионах, чем в генных регионах (<18%) во все временные точки (таблица 2). Наше исследование согласуется с предыдущими сообщениями в исследованиях на млекопитающих [43], которые показали сходное распределение меток h5K12 _ac и h4K9 _me2 по генным и межгенным регионам. Кроме того, эта работа согласуется с исследованием на рисе, где ~ 83% считываний совпадают с межгенными регионами и только несколько считываний выравниваются с генными местоположениями [44].

Затем мы назначили места связывания гистоновой ДНК одиннадцати хромосомам. Наибольшее количество меток h4K9 _me2 было обнаружено на хромосоме (chr) 11, за которой следовали chr07, 10, 08 и 05, в то время как метки h5K12 _ac наблюдались на chr11, за которыми следовали chr03, 01 и 02 (таблица S1). Большинство меток дифференциального метилирования гистонов и ацетилирования гистонов было обнаружено между временными точками 12 и 0 hai, что позволяет предположить, что более дифференцированно маркированные области были идентифицированы в ранней инокуляции.С другой стороны, 84Ivs12I имел максимальное количество генов, отмеченных в chr11, за которым следовали chr7 и chr10 (таблица S1). Наименьшее количество перекрывающихся генов выявлено на chr06. Кроме того, распределение гистоновых меток на 11 хромосомах визуализировали вручную с помощью браузера генома Integrative Genomics Viewer (IGV) [45] (рис. 2).

Рис. 2. Пиковые сигналы, визуализированные на хромосомах общих бобов с помощью Genome Viewer.

Сравнительная визуализация репрезентативной области на хромосоме 11 в фасоли обыкновенной, инокулированной ржавчиной, на участке 12 га с имитацией инокулированного образца в качестве фона для модификаций h4K9 _me2 и h5K12 _ac с использованием Integrative Genomics Viewer (IGV).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132176.g002

Гены, связанные с эпигенетической регуляцией во время обычного взаимодействия бобов и ржавчины

Считывания RNA-Seq и ChIP-Seq были сопоставлены отдельно с эталонным геномом (G19833), а затем сравнены, чтобы понять глобальную экспрессию генов и эпигенетическую регуляцию в зараженных ржавчиной фасоли обыкновенных, которые идентифицировали 279, 45, 145, 26 и 225 связанных генов. с метилированием ДНК, метилированием гистонов, ацетилированием гистонов, ремоделированием хроматина и белками Polycomb Group (PcG), соответственно (S1 фиг.).Большинство (70%) идентифицированных генов относятся к белкам метилирования ДНК и PcG, которые играют важную роль в регуляции транскрипции в дополнение к стабильности ДНК. Кроме того, мы проанализировали гены, кодирующие модификации гистонов, и идентифицировали больше генов, связанных с метилированием гистонов (39%), чем генов, связанных с ацетилированием гистонов (20%). Преимущественное связывание меток метилирования гистонов с хромосомами обычных бобов наблюдалось по сравнению с метками ацетилирования гистонов, что позволяет предположить, что активность гена избирательно регулируется при взаимодействии обычных бобов и ржавчины.

Метилирование гистонового лизина регулирует функцию хроматина и эпигенетический контроль экспрессии генов. Метка метилирования идентифицировала Su (var) 3-9, Enhancer-of-zeste, белки, связывающие домен Trithorax (SET), полиаминоксидазы (-1, -2 и -4), фитоен-десатуразу 3, дзета-каротин-десатуразу, гомоцистеин. Белок семейства S-метилтрансферазы и белки семейства лизинспецифической деметилазы (LSD). Однако связывание домена SET (30) и семейство белков LSD (6), которые обычно связаны с метилированием гистонового лизина, предпочтительно маркируются h4K9 _me2.Ацетилирование гистонов играет важную роль в модуляции структуры и функции хроматина путем добавления или удаления ацетильных групп в консервативных N-концевых лизинах гистонов [46]. Ацетилирование обычно связано с активацией транскрипции, и несколько HAT были идентифицированы как коактиваторы транскрипции. У животных высокие уровни триметилирования (h4K4 _me3) были связаны с привлечением факторов ремоделирования хроматина и других эффекторных белков в примированных патогенами образцах [47, 48].Выявленные дифференциально экспрессируемые гены связывания гистонов и ремоделирования хроматина включают альфин-подобный 6, такой как гетерохроматиновый белок 1 (LHP1), фактор сборки хроматина и факторы ремоделирования хроматина (crf), crf-18, crf-8 и crf-24, которые помощь в репозиции нуклеосом, связанных со стрессом.

Гены, связанные с устойчивостью, отмеченные метилированием и ацетилированием

Растения отвечают на микробные патогены, систематически вызывая гиперчувствительный ответ (HR) сразу после обнаружения фактора патогенеза белками, связанными с устойчивостью к болезням растений.В подтверждение этого мы идентифицировали четыре связанных с HR гена (белки, индуцирующие HR-подобные повреждения), которые могут играть возможную роль в HR-передаче сигналов ржавчины фасоли. Сообщалось о роли нескольких белков устойчивости (R) растений в распознавании грибковых патогенов и возникновении иммунных ответов [49]. Модификация метилирования с помощью h4K9 _me2 была преимущественно связана с семейством белков устойчивости к болезням, включая семейство лейциновых повторов (LRR), домен NB-ARC и Toll-интерлейкин-рецептор-сайт связывания нуклеотидов-лейцин-богатый повтор (TIR-NBS-LRR ) класс белков, локализованных на chr01, chr07, chr08, chr10 и chr11 (таблица 3).Между тем было замечено, что h5K12 _ac нацелен только на домен NB-ARC, содержащий белки устойчивости к болезням, расположенные на chr11 (таблица 4). Роль белков, содержащих домен NB-ARC, причастна к стрессу [50]. Структурно домен ARC содержит три элемента: APAF-1 (фактор, активирующий апоптотические протеазы-1), R-белки и CED-4 ( Caenorhabditis elegans, белок смерти-4). NB-ARC, функциональный домен АТФазы с сайтом связывания нуклеотидов (NB) регулирует активность белков R [50].

R-белки, которые были помечены как модификациями метилирования, так и ацетилирования, включают плейотропный устойчивый к лекарственным средствам белок 12, семейство LRR, NB-ARC-домен, содержащий и белки TIR-NBS-LRR (таблицы 3A и 3B). Другие R-белки, которые были однозначно помечены ацетилированием, включают ассоциированный белок 9 с множественной лекарственной устойчивостью и домен Coiled-Coil (CC), содержащий белок NBS-LRR, в то время как белки суперсемейства DnaJ-домена и эффлюсные белки семейства мультиантимикробных экструзионных белков (MATE) были уникальными отмечены метилированием.Белки суперсемейства DnaJ-домена, которые участвуют в клеточном стрессе и биосинтезе белков, обычно были представлены во всех трех временных точках. Переносчик семейства MATE и член 1 семейства ELKS / RAB6-взаимодействующий / CAST (Erc1), который придает устойчивость к этионину, аналог метионина был описан во взаимодействии Arabidopsis -гриб [51]. Точно так же мы определили белок семейства эффлюсов MATE, который может играть роль в регуляции углеродного метаболизма и опосредовать защитные реакции при взаимодействии бобов и ржавчины.Различия в экспрессии R-генов сравнивали по временным точкам (0, 12 и 84I hai), и максимальная разница в кратности изменения (> 1) наблюдалась на 12 hai, что подтверждает доказательства того, что каскады HR-сигналов были более активными в раннем возрасте. (12 га) инокуляция, чем при более поздней инокуляции (84 га).

Различия в экспрессии генов при обычном взаимодействии бобов и ржавчины

Анализ

RNA-Seq идентифицировал более 80% считываний, полученных из транскрипта, как предсказанных генов. Анализ дифференциальной экспрессии с использованием Cufflinks выявил 1369, 1308 и 1493 гена, экспрессируемых по-разному, и 541, 530 и 739 гена, уникально экспрессируемых между 12Ivs0I, 84Ivs0I и 84Ivs12I, соответственно (таблица S2).Среди дифференциально экспрессируемых генов 90 обычно разделялись между тремя временными точками (рис. 3). Максимальная дифференциальная экспрессия наблюдалась в четырех генах, чувствительных к стрессу, включая белок семейства стресса, реагирующий на раннюю дегидратацию (ERD), белок стресса, вызванный засухой хлоропластов, окислительный стресс 3 и белок бочкообразного альфа-бета-домена, индуцированный стрессом, между 0, 12 и 84 hai (таблица 5). Ген окислительного стресса 3 был активирован на 12 hai и подавлен на 84 hai, подтверждая доказательства ионного потока во время патогенеза.Были представлены изменения, наблюдаемые в семействе ERD и белках бочкообразного альфа-бета-домена, вызванных стрессом, в трех временных точках (таблица 5).

Рис. 3. Общее количество значительно обогащенных генов, идентифицированных между различными временными точками (0, 12 и 84 га) в фасоли с инокулированной ржавчиной по результатам анализа RNA-Seq.

Количество уникально и обычно обогащенных значимых генов и их соответствующие временные точки были изображены в виде диаграммы Венна. Например, уникально обогащенные важные гены и их соответствующие временные точки включают: 541 (12Ivs0I), 530 (84Ivs0I) и 739 (84Ivs12I).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132176.g003

Помимо белков, индуцированных стрессом, в нашем анализе были значительно обогащены белки надсемейства пероксидазы. На основании эволюционных и функциональных взаимоотношений внутри белков суперсемейства пероксидаз растений было сообщено о трех структурно различных классах. В этом исследовании мы идентифицировали секреторные грибковые пероксидазы или суперсемейство белков класса II, которые участвуют в разрушении компонентов первичной клеточной стенки, включая лигноцеллюлозы и лигнины.Предполагается, что эти белки играют роль в формировании грибковых асперсориумов и гаусториев. Более того, ферменты, модифицирующие клеточную стенку, значительно экспрессировались на уровне 12 га. Также было предоставлено около 50 идентифицированных дифференциально экспрессируемых белков, связанных с защитой (таблица 6). Среди них белки позднего удлиненного гипокотиля (LHY), фактора ответа этилена (ERF), W-бокса, содержащего TF (WRKY), и протеин протодермального фактора (PDF), которые были широко представлены в наборе данных и по-разному выражались между временными точками (0, 12 и 84 га).

Анализ обогащения

GO был проведен с использованием Panther [52] и функционально классифицирован на основе KOG. В общей сложности было идентифицировано более 1000 надежных генов или транскриптов с учетом оценки обогащения (> 1,3), значения P (<1,0E-1) и частоты ложных открытий (<0,05). Из них 451 (41,30%), 361 (33,06%) и 280 (25,64%) ген или транскрипт относятся к биологическим процессам, клеточным компонентам и категориям молекулярных функций, соответственно. Гены в большей группе, биологические процессы (41.30%) имеют высокую гомологию с генами, участвующими в абиотическом и биотическом стрессе, защитном ответе и передаче сигнала, в то время как в остальных группах (58,7%) общие гены с функциями, связанными с структурой клетки, метаболизмом белков, процессами транспорта и регуляцией транскрипции. (Рис 4). Наблюдаемая оценка обогащения была самой высокой для генов, связанных со стрессом, и генов R и в основном была представлена на уровне 12 hai, что позволяет предположить, что чувствительные к патогену сигнальные каскады были активны в ранней инокуляции.

Рис. 4. Функциональная классификация значительно обогащенных генов в инокулированных имитацией и ржавчиной (0, 12 и 84 hai) листьях фасоли фасоли.

Гены, обогащенные GO, функционально классифицируются на основе евкариотических ортологических групп (KOG). Категории KOG представлены на оси X, а количество генов в соответствующих классах показано на оси Y.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132176.g004

Факторы транскрипции, активно экспрессирующиеся при обычном взаимодействии бобов и ржавчины

Ранее сообщалось, что несколько факторов транскрипции модулируют экспрессию генов при биотических и абиотических стрессах [53].Это исследование идентифицировало несколько генов и TF, которые активно экспрессировались как в ранних, так и в поздних защитных ответах при взаимодействиях растений и грибов. Среди них, в основном, шесть TF, такие как гомео-домен, WRKY, основной домен лейциновой молнии (bZIP), миелобластоз (MYB), отсутствие апикальной меристемы; Arabidopsis фактор активации транскрипции; и чашеобразные семядоли (NAC) и фактор связывания центромеры (CBF-1) (таблица 7; таблица S3), а также шесть генов, включая митоген-активированные протеинкиназы (MAP), кальций-зависимые протеинкиназы, глутатион-S-трансферазы, кальмодулин Связывающие, патогенезоподобные белки семейства гликозил / гидролаз дифференциально экспрессировались во время инокуляции бобовой ржавчины.Кроме того, транскрипты сравнивали с базой данных факторов транскрипции бобовых (TFDB), чтобы идентифицировать десять распространенных семейств TF homeobox (HB), WRKY, bZIP, MYB, NAC, фактор транскрипции C3H 33 (C3h4), активирующий белок 2 (AP2), основная спираль-петля-спираль (bHLH) и гомеодомен растения (PHD). Из них семейства TF WRKY, bZIP, MYB были дополнительно подтверждены с помощью RT-PCR (обсуждается в другом месте в тексте). В Arabidopsis сообщалось о TF-DREB (связывание элементов, реагирующих на дегидратацию) при различных абиотических стрессах, включая засуху, холод и высокое содержание соли [54].Кроме того, растения разработали разнообразные защитные механизмы для нейтрализации молекул, вызывающих абиотический и биотический стресс, с помощью детоксифицирующих ферментов. Здесь мы идентифицировали шесть дифференциально экспрессируемых детоксифицирующих ферментов, включая катионную пероксидазу 3, каталазу 2, аскорбатпероксидазу-1 и белки -3, суперсемейство транспорта / детоксикации тяжелых металлов и глутатион-S-трансферазу (таблица S4A). Из них аскорбатпероксидаза 1 и 3 и катионная пероксидаза 3 были активированы на 84 hai и подавлены на 12 hai.С другой стороны, гены каталазы 2 и суперсемейства транспорта / детоксикации тяжелых металлов и глутатион-S-трансферазы были активированы на 12 hai по сравнению с 84 hai. Кроме того, гены, ассоциированные с цитохромом P450 (16), которые содержат сайты узнавания ТФ MYB и Myelocytomatosis (MYC), которые играют важную роль в механизмах защиты растений, были высоко экспрессированы на уровне 84 га (таблица S4B). Кроме того, были идентифицированы 11 генов, специфичных для хлоропластов, которые предположительно играют роль в клеточном метаболизме и стрессовых ответах (таблица S4C).Внутри генов, специфичных для хлоропластов, максимальная разница в экспрессии наблюдалась между 84 hai и 12 hai. Гормоны стресса, абсцизовая кислота (ABA) и салициловая кислота (SA) индуцируют токофенолциклазу, и мы идентифицировали повышенную экспрессию токофенолциклазы на уровне 84 га.

В образцах, обработанных патогенами, регуляция, опосредованная патоген-ассоциированными молекулярными паттернами (PAMP), является наиболее частым HR-ответом, вызываемым растением с участием нескольких регуляторных каскадов генов. Гены АБК-стрессового ответа (Asr), связанные с сигнальным путем АБК, которые играют важную роль в стрессе, вызываемом засухой, описаны у фасоли обыкновенной [55], и роль АБК в биотическом стрессе становится все более очевидной [56, 57].Другие фитогормоны, гормоны салициловой кислоты (SA), жасмоновой кислоты (JA) и этилена (ET) также играют важную роль в защитных реакциях растений [58]. Растения борются с некротрофными и биотрофными патогенами, запуская JA и SA-опосредованные сигнальные пути. Регулятор роста растений, ABA и семейство TF WRKY действуют как молекулярные переключатели между SA и JA-зависимыми защитными ответами растений против травоядных и некротрофных патогенов [59]. Перекрестная связь между сигнальными путями у растений очевидна при биотических и абиотических стрессах.Присутствие высоких уровней WRKY TF и некоторых сигнальных генов SA в данных транскриптома предполагает возможное взаимодействие в устойчивости бобов к ржавчине и будет изучено в будущем. Иммунитет, вызванный патогеном, составляет первый уровень защиты растений и ограничивает распространение патогена. Десять дифференциально экспрессируемых генов хитиназы, включая хитиназоподобный белок и хитиназу А, которые участвуют в PTI, были идентифицированы в фасоли обыкновенной (таблица S4D). По сравнению с экспрессией других генов, связанных с PTI, экспрессия генов R, включая белок устойчивости CC-NBS-LRR и белок устойчивости типа NBS, была значительно высокой.Также белок теплового шока 90.1 и домен NB-ARC, содержащий белок устойчивости к заболеванию (RPM1), были высоко экспрессированы на 84 hai. В А . thaliana , RPM1 придавал сопротивление P . syringae , экспрессирующие avrRpm, что вызывает гиперфосфорилирование белка 4, взаимодействующего с RPM1 (RIN4), что впоследствии вызывает устойчивость к заболеванию [19].

Анализ пути KEGG дифференциально экспрессируемых транскриптов в ответ на U . appendiculatus стресс у фасоли обыкновенной выявил 324 пути, связанных с физиологическими процессами (таблица S5). Кроме того, функциональная классификация выявила четыре основные категории с числом генов, включая: i) метаболические пути (704), ii) биосинтез вторичных метаболитов (321), iii) микробный метаболизм в различных средах (117) и iv) структуру рибосом (108). . Более конкретно, мы обнаружили один путь, который включает десять генов, потенциально участвующих в реакции устойчивости к ржавчине фасоли (рис. 5).Например, три гена каллозосинтазы 5 (CalS5), рецептор 1 PEP1 и белок суперсемейства протеинкиназы, богатого лейцином рецептора, были обильно экспрессированы (кратность изменения> 2) в ответ на взаимодействие фасоль-патоген (рис. 6; таблица S6. ). Предполагаемые функциональные роли этих белков обсуждаются ниже. Каллоза-синтаза 5 является важным компонентом специализированных клеточных стенок, таких как стенка каллозы, пробки каллозы и стенка пыльцевых трубок, и ее синтез индуцируется инвазией патогенов, ранением и в ответ на сигналы окружающей среды.Рецептор 1 PEP 1 (PR1), ключевой компонент пути PEPR, опосредует защитные реакции после распознавания микробами. У растений PR1 запускает системный иммунитет, индуцированный патогенами. Белок цинкового пальца (ZPR1), присутствующий в цитоплазме, взаимодействует с рецепторной тирозинкиназой, которая, как предполагается, играет роль в передаче сигналов, в то время как мотивы LRR в первую очередь помогают защитить растение-хозяин от вторжения патогенов.

Рис. 6. Дифференциально экспрессируемые гены, идентифицированные в пути взаимодействия фасоли и ржавчины (ID: 04626) в точках 0, 12 и 84 hai.

Дифференциальная экспрессия (Log ₂ FC> 2) шести выбранных генов (канал 14, управляемый циклическими нуклеотидами, каллозосинтаза 5, рецептор 1 PEP1, белок семейства протеинкиназных рецепторов с высоким содержанием лейцина, домен NB-ARC- содержащий белок устойчивости к заболеванию и белок теплового шока 90.1) в разные моменты времени, как показано на фигуре.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132176.g006

Различия в модификациях гистонов и транскрипции в ответ на взаимодействие с ржавчиной

Корреляция между метилированием гистонов и инактивацией транскрипции была проанализирована путем сравнения наборов данных RNA-Seq и ChIP-Seq для идентификации 265, 191 и 200 обычно экспрессируемых генов между 12Ivs0I, 84Ivs0I и 84Ivs12I, соответственно (таблица S7).Среди них chr07, за которым следуют chr11 и chr10, имели максимальное количество генов, которые перекрывались в 12Ivs0I между наборами данных RNA-Seq и ChIP-Seq. Chr06 имел наименьшее количество генов, наблюдаемое в модификации h4K9 _me2. Аналогичным образом, используя метку ацетилирования гистонов, мы идентифицировали 300 (12Ivs0I), 244 (84Ivs0I) и 249 (84Ivs12I) обогащенных генов / цис- -элементов, которые были общими для анализа RNA-Seq и ChIP-Seq. Из них chr11 имел максимальное количество генов в разные моменты времени.

Белки, специфичные для метилирования, которые одновременно были обнаружены между RNA-Seq и ChIP-Seq, включают гистоновый моноубиквитинирование 1 и гистон h4K4-специфическую метилтрансферазу (семейство SET7 / 9), и эти белки показали высокий уровень экспрессии в момент времени 12 hai. Точно так же модификации ацетилирования, обычно идентифицируемые между ацетилированием и регуляцией транскриптома, включают гистонацетилтрансферазу из семейства 12 связывающих элементов сАМР (CREB) — связывающих белков (CBP), гистоновую деацетилазу 3 и белки суперсемейства гистонов (таблица 8).Используя сравнительный подход, три высокоэкспрессируемых (Log ₂ FC> 2) защитно-ответных (низкомолекулярный, богатый цистеином 68, белок гигантеи и белки суперсемейства шаперона DnaJ-домена) и три белка R (белок устойчивости к плейотропным лекарственным средствам 12) , Семейство оттока MATE и домен, содержащий NB-ARC) были идентифицированы одновременно в данных транскриптома, в модификациях метилирования гистонов и ацетилирования. Всего было идентифицировано пять различных типов белков семейства LRR, LRR, NB-ARC, CC-NBS-LRR, TIR-NBS-LRR и GTPase, связанные с группой Ras белки LRR, которые могут играть роль во взаимодействии с ржавчиной грибов в фасоли обыкновенной. .Три резистентных белка, плейотропный лекарственный ген 12, LRR и ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью белок 9 были однозначно идентифицированы между 12 hai, что подтверждает роль R-белков в передаче сигналов HR. Белок 12 устойчивости к плейотропным лекарственным средствам был одновременно обогащен метками метилирования и ацетилирования гистонов и данными транскриптома.

В каскадах передачи сигналов HR было высказано предположение, что фактор патогенеза взаимодействует с белками R, которые действуют как первая линия защитных молекул.У растений активация генов R запускает поток ионов и в конечном итоге приводит к окислительному взрыву (активные формы кислорода, ROS) пораженных клеток. Помимо белков, устойчивых к растениям, высокоэкспрессируемыми членами были: белки суперсемейства пероксидаз, надсемейство Россманн-фолд, связывающее NAD (P), и белки семейства оксидоредуктаз, связывающие FAD / NAD (P). Кроме того, два белка, чувствительных к стрессу, бета-фруктофуранозидаза 5 и суперсемейство протеинкиназ, однозначно экспрессировались на уровне 12 hai. Были предоставлены другие белки, значительно обогащенные как наборами данных, так и их соответствующими функциями (Таблица 9).Среди них два белка, связанных с углеводным метаболизмом, включая рибулозо-бисфосфаткарбоксилазу и дельта / эпсилон-цепь АТФ-синтазы, были высоко экспрессированы на 12 hai, чем на 84 hai.

ChIP-КПЦР анализ общего взаимодействия бобов и ржавчины

Мы также проанализировали иммунопреципитированную ДНК на наличие модификаций ацетилирования (h5K12 _ac) и метилирования (h4K9 _me2) с использованием ПЦР в реальном времени для подтверждения различий в связывании между h4 и h5 при 0, 12 и 84 hai.Список праймеров, используемых для ПЦР в реальном времени, приведен в таблице S8A. Наши результаты ПЦР в реальном времени с чипами совпадают с результатами анализа ChIP-Seq. При 0 hai активатор транскрипции, фактор транскрипции B3 и нечувствительный к гибберелловой кислоте (GAI) -репрессор семейства факторов транскрипции Ga1 (RGA) -Scarecrow (SCR) (GRAS) были связаны с меткой активации h5K12 _ac, тогда как NAC-транскрипционный ген фактор-подобный 9, фактор транскрипции ДНК Pol II и семейство генов Nmra-подобных негативных регуляторов транскрипции были помечены как h4K9 _me2.Важность факторов транскрипции в опосредовании модификаций гистонов при биотических стрессах становится все более очевидной [60]. Маркировка активатора транскрипции и белка семейства фактора транскрипции B3 была выше на 84 га, чем на 12 га после инокуляции. Однако фактор транскрипции семейства GRAS показал более высокую экспрессию на 12 hai по сравнению с 84 hai (рис. 7). Подобно нашему исследованию, было замечено, что TF GRAS накапливаются в защитном ответе на P . syringae pv. в томате [19].Сходным образом роль фактора транскрипции теплового шока B3 (HSFB3) участвует в ответе на абиотический стресс и в микоризной ассоциации [61]. Мы наблюдали значительное изменение маркировки HSFB3 между 12 и 84 га. Было обнаружено, что у сои фактор транскрипции NAC регулирует 72 гена, которые были активны в развитии проростков [62]. ТФ, содержащий NAC-домен, был активирован в 4 раза при 12 hai с меткой метилирования (h4K9 _me2). Только незначительное изменение наблюдалось в экспрессии между инокуляцией 12 hai и 84 hai для Myb-подобного белка семейства регуляторов транскрипции HTH с меткой h5K12 _ac и белка семейства негативных регуляторов транскрипции Nmra-подобных и факторов транскрипции ДНК Pol II с h4K9 _me2 отметка.Результаты показали, что все семь генов из ChIP-Seq достоверно (значение p <0,05) экспрессировались между 0, 12 и 84 hai.

Рис. 7. Подтверждение относительных уровней экспрессии семи выбранных генов из анализа ChIP-Seq с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени (qPCR).

Характер экспрессии отобранных генов фасоли в пробах листьев с имитацией и ржавчиной в разные моменты времени. Ось x показывает разные моменты времени, а ось y показывает значение относительного изменения кратности (Log ₂ FC).Различные алфавиты на этой фигуре указывают на статистически значимую (p-значение <0,05) разницу в относительной экспрессии каждого гена в разные моменты времени (0, 12, 84 га) как для инокулированных, так и для имитационных образцов листьев. Результаты количественной ПЦР из двух технических повторов подвергали анализу ANOVA с использованием программного обеспечения Minitab17.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132176.g007

ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в реальном времени, проверка анализа RNA-Seq

Благодаря повышенной чувствительности и высокой пропускной способности, RNA-Seq и ChIP-Seq стали выбором технологий глубокого секвенирования для всесторонних исследований экспрессии и регуляции генов у нескольких видов растений.Сравнительный анализ RNA-Seq и ChIP-Seq выявил 501 дифференциально экспрессируемый ген, которые были общими в обоих наборах данных. Среди них семь генов были отобраны для подтверждения уровня их экспрессии с помощью ПЦР с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) и количественной ОТ-ПЦР в реальном времени (qPCR). Чтобы подтвердить, что РНК, использованная в этих экспериментах, не была загрязнена ДНК, мы амплифицировали гДНК и кДНК с SB1, молекулярным маркером, специфичным для обычных бобов [27]. Праймеры, полученные из последовательности SB1, использовали для амплификации продукта длиной 420 п.н. из геномной ДНК и кДНК.Как и ожидалось, SB1 амплифицировался в геномной ДНК, но не в кДНК (S2A на фиг.). Интересно, что праймеры из NAC-транскрипционного гена, подобного фактору 9 (Phvul.010G120700), амплифицировали длинную фланкирующую интронную геномную ДНК, давая ампликон 963 п.н. и ампликон 731 п.н. в кДНК (S2B фиг.).

Для качественной и количественной проверки дифференциально экспрессируемых транскриптов из RNA-Seq, RT-PCR и qPCR были выполнены в трех разных временных точках (0, 12 и 84 hai) для семи генов, отвечающих за защиту. Эти гены были выбраны потому, что они по-разному экспрессировались в фасоли на основании нашего анализа РНК-Seq, а также потому, что они играли важную роль в защитных реакциях других бобовых культур против грибкового патогена Cercosporidium personatum в арахисе и бактериального патогена Xanthomonas axonopodis сои [63, 64].Праймеры были сконструированы для выбранных генов с использованием инструмента для конструирования праймеров GenScript для ПЦР в реальном времени (TaqMan); Список праймеров приведен в таблице S8B. Включенные гены кодируют семейство LRR, цитохром Р450, связывание кальмодулина, хитиназу, семейства ТФ WRKY, MYB и bZIP. Семейство LRR, кальмодулин-связывающие и MYB-подобные TF, идентифицированные здесь, были описаны в ответ на инфекцию Botryosphaeria dothidea у тополя [65]. Сообщалось о различных классах белков LRR, которые играют важную роль в иммунных ответах растений.Они действуют как первая линия защиты, опосредуя ответ через сигнальный путь SA, как сообщается в отношении устойчивости к P . syringae белков в Arabidopsis [19]. Недавно сообщалось о роли белков семейства NBS-LRR в защитных реакциях у ятрофы и клещевины [66]. В нашем исследовании мы наблюдали двукратное снижение экспрессии белков семейства LRR в ответ на U . appendiculatus обыкновенный боб от 0 до 84 га.Ряд генов, реагирующих на раны, включая ферменты, модифицирующие клеточную стенку, сигнальные молекулы и вторичные метаболиты, были активны в защитных реакциях растений, пока патоген вторгался в хозяина [67]. Из них в этом исследовании были идентифицированы некоторые гены, связанные с осмотическим стрессом и регулируемые тепловым шоком, такие как хитиназа, кальмодулин и транскрипция bZIP. Ранее сообщалось, что хитиназы взаимодействуют между растениями и патогенами в качестве защитной реакции [68]. В настоящем исследовании была обнаружена положительная корреляция между активностью хитиназы и устойчивостью к ржавчине фасоли.Результаты количественной ПЦР в реальном времени (кПЦР) показали более высокие уровни хитиназы в инокулированных образцах, чем в имитированных (рис. 8). Наши результаты совпадают с предыдущим исследованием, которое показало увеличение активности хитиназы в ответ на B . dothidea инфекция тополя, что подтверждает противогрибковые свойства растений [69]. BZIP Белки представляют собой большую группу ТФ, консервативных у эукариот, включая однодольные и двудольные, которые структурно характеризуются наличием i) основной области, которая связывается с ДНК, и ii) лейциновой молнии, которая участвует в гомо- и белках. гетеродимеризация [70]. BZIP Семейства генов ранее сообщались в ответ на атаку патогенов у различных видов растений, включая Arabidopsis , рис, кукурузу, сорго, клещевину, хлопок и тополь [71]. Сходным образом, факторы транскрипции bZIP фасоли активировались в ответ на U . appendiculatus возбудитель. Результаты ОТ-ПЦР показали, что большая разница в экспрессии наблюдалась для семейства белков факторов транскрипции bZIP.

Рис 8.Подтверждение относительных уровней экспрессии семи выбранных генов из анализа RNA-Seq с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени (qPCR).

Характер экспрессии отобранных генов фасоли в пробах листьев с имитацией и ржавчиной в разные моменты времени. Ось x показывает разные моменты времени, а ось y показывает значение относительного изменения кратности (Log ₂ FC). Различные алфавиты на этой фигуре указывают на статистически значимую (p-значение <0,05) разницу в относительной экспрессии каждого гена в разные моменты времени (0, 12, 84 га) как для инокулированных, так и для имитационных образцов листьев.Результаты количественной ПЦР из двух технических повторов подвергали анализу ANOVA с использованием программного обеспечения Minitab17.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132176.g008

При обычном взаимодействии бобов и ржавчины мы ожидали возможных перекрестных помех между генами, связанными со стрессом, и ТФ. Например, сообщалось о повышенных уровнях кальмодулина в ответ на авирулентные патогены или флагеллин или салициловую кислоту в Arabidopsis [72]. Независимо, перекрестное взаимодействие между кальмодулином и WRKY-регулируемыми генными сетями было предложено в P . syringae инфекция в Arabidopsis [73]. В нашем исследовании уровень кальмодулина был повышен на 12 га по сравнению с 84 га, что подтверждает идею ранней реакции HR в Sierra на ржавчину фасоли. В Arabidopsis проведена инокуляция Alternaria brassicicola и A . alternata увеличивал уровни транскриптов генов семейства цитохрома p450 в 10 раз [74]. В этом исследовании цитохром p450 был активирован в разные моменты времени, но трехкратное увеличение наблюдалось на 12 hai, что указывает на его роль в раннем защитном ответе, чем в более позднем взаимодействии.Поддерживая идею перекрестного взаимодействия в передаче сигналов болезни R, вышестоящие последовательности генов цитохрома p450 содержат сайты узнавания для факторов транскрипции MYB, MYC и WRKY, которые модулируют защитные реакции растений. Сравнивали относительные уровни экспрессии этих цис--действующих элементов.

Члены семейства факторов транскрипции MYB участвуют в биосинтезе флавоноидов и в защитных реакциях [75]. Несколько вариантов генов MYB были идентифицированы и охарактеризованы во взаимодействиях растение-патоген.В нашем исследовании факторы транскрипции MYB были высоко экспрессированы в ранние временные точки и недостаточно экспрессированы в поздние временные точки. WRKY — это большое семейство факторов транскрипции, о которых сообщалось при абиотических и биотических стрессах. Ранее гомологи факторов транскрипции WRKY были идентифицированы в защитных ответах против Phytophthora spp . в картофеле и Xanthomonas spp. . в рисе [76]. В этом исследовании мы идентифицировали дифференциально экспрессируемые факторы транскрипции WRKY, которые участвуют в последующей регуляции во время U . appendiculatus взаимодействие в фасоли обыкновенной. Для большинства выбранных генов профили экспрессии qRT-PCR совпадали с данными RNA-Seq. Результаты показали, что все семь генов из ChIP-Seq достоверно (значение p <0,05) экспрессировались между 0, 12 и 84 hai. Чтобы подтвердить наши результаты ПЦР в реальном времени, дополнительно были повторно проверены семь генов с помощью ПЦР с обратной транскриптазой, где cons7 использовалось в качестве контроля (S3 фиг.). Из семи проанализированных генов 12 hai показали более высокие уровни экспрессии по сравнению с 84 генами hai, что подтверждает роль генов, отвечающих за защиту, в ранних взаимодействиях растений с патогенами.

Материалы и методы

Растительный материал и условия роста

Сорт фасоли обыкновенной «Сьерра» использовался во всех экспериментах в данном исследовании. Сьерра была получена в результате скрещивания мезоамериканских коммерческих сортов пегой лошади с линиями разведения темно-синей и черной фасоли в Университете штата Мичиган в начале 1980-х годов. Отбор потомства проводился в течение девяти сезонов по таким признакам, как размер семян, цвет и устойчивость к ржавчине [77]. Через три дня после прорастания семян на влажной фильтровальной бумаге проростки переносили в пластиковые горшки, как сообщалось ранее [27], и выдерживали в теплице при 28/20 ° C и световом периоде 14/10 часов (Государственный университет Делавэра, Дувр, Делавэр). .Листья 10 двухнедельных растений инокулировали грибковой ржавчиной Uromyces appendiculatus (раса 53). Всего в этом исследовании было использовано 90 растений, из которых образцы были собраны в трех разных временных точках после инокуляции (0, 12 и 84 га), в двух условиях обработки (инокулированный и имитационный) и в трех биологических повторностях (R1, R2 и R3). Для каждой временной точки поддерживали 30 растений с 10 растениями в повторности, из которых пять растений были инокулированы патогеном ржавчины, а пять — имитационной инокулированной.Мок-инокулированные растения опрыскивали водой, содержащей 0,01% Твина 20, и служили контролем. Растения естественно восприимчивого к ржавчине сорта Olathe служили контролем для подтверждения успешности инокуляции. Листья собирали как с инокулированных, так и с имитационных растений через 0, 12 и 84 часа после инокуляции (hai) для экспериментов с ChIP-Seq и RNA-Seq. Все образцы мгновенно замораживали жидким азотом и хранили при -80 ° C.

Выделение и иммунопреципитация хроматина

Анализ

ChIP был выполнен, как описано ранее в Lam Laboratory [33], и модифицирован для фасоли обыкновенной.Вкратце, образцы измельчали до тонкого порошка в жидком N ₂ и фиксировали в холодном буфере для ядерной изоляции, содержащем 1% формальдегид с 20 мкл ингибитора протеазы (# 87786, Thermo Scientific, Rockford, IL) при комнатной температуре. Реакцию поперечного сшивания останавливали 2 М глицином. Лизат фильтровали через один слой ткани Mira (Calbiochem, SanDiego, CA) в центрифужную пробирку, и ядра осаждали при 3000 g в течение 10 минут при 4 ° C. Осадок встряхивали и ресуспендировали в 300 мкл холодного буфера для изоляции ядер без формальдегида.Суспензию ядер переносили в равный объем 15% раствора Перколла, центрифугировали при 3000 g в течение 5 мин и ресуспендировали в буфере для лизиса ядер. Ядерный лизат обрабатывали ультразвуком пять раз, каждый раз в течение 15 с при мощности 6, используя Soniprep 150 (MSE (UK) Ltd, Лондон, Великобритания), чтобы разрезать ДНК на фрагменты примерно 100–350 п.н. (S4 Рис.). Ядерный лизат разводили в 10 раз буфером для разведения ChIP. 100 мкл образца хроматина инкубировали с 5 мкл кроличьего поликлонального антитела, которое было индуцировано против синтетического пептида, соответствующего N-концу гистона h5, ацетилированного по K12 (# A-4029-050; Epigentek, Farmingdale, NY).Аналогичным образом, 5 мкл области эпитопа мыши гистона h4, диметилированного по аминокислоте из антитела 1–18 (№ 17–681; Millipore, Сан-Диего, Калифорния), использовали для инкубации с хроматином в 900 мкл буфера для разведения ChIP при 4 ° C в течение ночи. В этом исследовании использовались две модификации гистонов: h4K9 _me2 и h5K12 _ac. В Arabidopsis метка h4K9 _me2 была оценена на уровне всего генома с использованием иммунопреципитации хроматина (ChIP) с последующим анализом мозаичного микрочипа, ChIP-chip [78].Также они идентифицировали преимущественную локализацию метилирования h4K9 в гетерохроматине. С другой стороны, хроматин, меченный h5K12 _ac, в первую очередь локализован в активных кодирующих областях генома и, следовательно, способствует связыванию транскрипционных факторов, способствуя транскрипции [79]. Таким образом, мы выбрали эти две гистоновые метки, чтобы понять изменения в активном и неактивном состоянии хроматина во всем геноме у инокулированного ржавчиной и имитационного инокулирования фасоли сорта Sierra. К образцу добавляли 20 мкл магнитных шариков A / G белка Pierce (# 88802, Thermo Scientific, Rockford, IL) и инкубировали в течение 3 ч при 4 ° C с последующей инкубацией с козьими антителами против кроличьих IgG (# ab72465; Кембридж, Массачусетс).Магнитные шарики собирали центрифугированием и трижды промывали буфером для разбавления ChIP. Комплекс антитело-хроматин промывали, элюировали и деструктивно связывали 20 мкл 5 М NaCl при 65 ° C в течение ночи. Образцы обрабатывали протеиназой-K (Thermo Scientific, Rockford, IL при 45 ° C в течение 2 ч. ДНК получали путем экстракции фенол-хлороформом, и последующее осаждение этанолом ресуспендировали в 20 мкл буфера ТЕ. Для каждой обработки 100 нг раствора очищенную ДНК использовали для создания библиотеки ChIP-Seq с использованием Illumina HiSeq 2500 (Illumina Inc., Сан-Диего, Калифорния), секвенирование которого проводили в Биотехнологическом институте Делавэра (Ньюарк, Делавэр). Образцы с имитацией прививки для каждой из временных точек в трех биологических повторах служили контролем для образцов с прививками во время биоинформатических анализов.

Выделение РНК

Суммарную РНК экстрагировали из инокулированных и имитированных образцов замороженных листьев, собранных на 0, 12 и 84 га, с использованием TRIzol (# 15596–026, Ambion, Carlsbad, CA) в соответствии с протоколом производителя.Остаточную геномную ДНК в РНК удалили обработкой ДНКазой I в соответствии с инструкцией (№ AM1906, Ambion, Carlsbad, CA). Во всех образцах РНК загрязнение реагентами (отношения A260 / A230 нм) и загрязнение белками (отношения A260 / A280 нм) определяли с помощью спектрофотометра Nanodrop 2000 (Thermo Scientific, Wilmington, DE), и использовали только образцы с OD260 / 280> 1,8. для секвенирования и последующей проверки. Чистоту / качество РНК оценивали с помощью электрофореза в агарозном геле (1,2%) и Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния) на основании интенсивности полосы 28S / 18S рРНК (2: 1) и числа целостности РНК (RIN)> 8, соответственно.Количество высококачественной РНК (RIN> 8) находилось в диапазоне 0,8–1,0 мкг во всех образцах.

Создание библиотеки и секвенирование

Качество, чистота и размер иммунопреципитированных образцов ДНК определяли с помощью анализатора фрагментов AATI (Ames, IA). Библиотеки ChIP-Seq (50 п.н.) получали с использованием набора для подготовки образцов Illumina TruSeq ChIP Sample Preparation kit (# IP-202-1012; Illumina Inc., Сан-Диего, Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя. Аналогичным образом качество и чистоту РНК оценивали с помощью анализатора фрагментов (Ames, IA).Библиотеки РНК-Seq (50 п.н.) получали с использованием набора для подготовки образцов многожильной мРНК Illumina TruSeq (# RS-122-2101; Illumina Inc., Сан-Диего, Калифорния) в соответствии с руководящими принципами. Данные с высокой производительностью, полученные в этом исследовании, передаются в секцию SRA NCBI с номером биопроекта PRJNA280864 для экспериментов ChIP-Seq и RNA-Seq.

Рабочий процесс анализа данных ChIP-Seq

Базовый вызов выполнялся в реальном времени из сигналов последовательности, а демультиплексированные файлы FASTQ были сгенерированы с использованием согласованной оценки последовательности и изменения (CASAVA).Собирались необработанные считывания, и их качество оценивалось с помощью FastQC для определения статистики данных, таких как количество считываний, количество отдельных нуклеотидов, общее количество нуклеотидов и процент GC. Затем необработанные считывания были обрезаны и отфильтрованы для удаления данных низкого качества и сопоставлены с геномом Phaseolus vulgaris G19833 (Phytozome версии 1.0) с не более чем двумя несовпадениями с использованием Bowtie v1.0 [80]. Пики, отмеченные метилированием (h4K9 _me2) и ацетилированием (h5K12 _ac), были идентифицированы с использованием пространственной кластеризации для идентификации ChIP-обогащенных областей (SICER) и аннотированы с помощью HOMER как для инокулированных, так и для имитированных образцов.Была произведена строгая фильтрация при выявлении дифференциально отмеченных пиков. Ген считался метилированным (модифицированным h4K9 _me2) или ацетилированным (модифицированным h5K12 _ac) только в том случае, если он перекрывался (на основе «известных» аннотированных генов) с координатами пика по крайней мере на одно основание.

Анализ транскриптома

Качество последовательности оценивалось с помощью FastQC (v 0.10.1), считывания были обрезаны для адаптеров, а считывания низкого качества были отфильтрованы (оценка Phred <30) с помощью набора инструментов FASTX (v 0.0.13), и полученные в результате высококачественные считывания не менее 50 оснований были сохранены (~ 97% от общего количества считываний). Собранные таким образом качественные чтения были сопоставлены с эталонным геномом с помощью TopHat (v 2.0.9) с параметрами по умолчанию. Аннотации генома (файл .gff3), доступные на Phytozome, использовались для извлечения признаков из анализа транскриптома. HTSeq (v 0.5.3p7) использовался для генерации необработанных счетчиков чтения для каждого гена из каждого образца с использованием выходных данных TopHat и известных аннотаций генов. Результирующая информация аннотации (.bam files) был использован для определения дифференциальной экспрессии генов с помощью пакета программ Cufflinks (v 2.0.2) [81]. Cufflinks использует опцию коррекции множественных считываний, которая выполняет процедуру начальной оценки для более точного учета считываний, отображаемых в нескольких местах в геноме, путем добавления весов. Cuffdiff использует полученные таким образом веса для вычисления значений фрагментов на килобазу экзона на миллион отображенных фрагментов (FPKM), а затем определяется дифференциальная экспрессия генов путем попарных сравнений между наборами данных.

Онтология генов и анализ путей

Анализ дифференциальной экспрессии и обогащения генов в пробах имитированных и инокулированных листьев в разные моменты времени проводился с использованием запонок после функциональной аннотации PANTHER [82]. Кроме того, мы классифицировали гены, связанные с взаимодействием бобов и ржавчины, на основе функциональных классов KOG. Гипергеометрический тест с множеством корректировок [83] использовался для анализа GO и был разделен на соответствующие классы или аннотации путей на основе Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG; http: // www.genome.jp/kegg/kegg2.html).

ОТ-ПЦР и количественная проверка ОТ-ПЦР в реальном времени

Для качественного определения экспрессии гена (мРНК) и количественного измерения амплификации кДНК с помощью термоциклера MyCycler (Bio- Rad Laboratories, Hercules, CA) и ABI 7500 в реальном времени (Applied Biosystems, Foster City, CA) соответственно. Мы выбрали семь генов, отвечающих за защиту, которые дифференциально экспрессируются на основе анализа РНК-Seq, и семь генов, дифференциально маркированных h5K12 _ac (4 гена) и h4K9 _me2 (3 гена) из анализа ChIP-Seq, представляющих активный и неактивный хроматин. состояний во взаимодействиях боб-ржавчина.Кроме того, ранее сообщалось, что эти гены связаны с устойчивостью к болезням у сои [84] и Arabidopsis [85]. Подробности генов и соответствующих праймеров приведены в таблицах S8A и S8B. Праймеры для выбранных генов, отвечающих за защиту, были разработаны с использованием онлайн-инструмента для конструирования праймеров ПЦР в реальном времени (TaqMan) (GenScript USA Inc., Piscataway, NJ) и использованы для качественного и количественного определения экспрессии генов. РНК высокого качества (RIN> 8) 0,8–1.0 мкг получено из инокулированных и ложно инокулированных листьев и было подвергнуто обратной транскрипции в комплементарную ДНК первой цепи (кДНК) с помощью Oligo dT с использованием системы синтеза первой цепи Superscript III (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя. RT-PCR проводили в стандартных условиях PCR (94 ° C в течение 30 секунд, 60 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 30 секунд) в течение 30 циклов. Амплифицированные продукты разделяли в 2% агарозном геле, окрашенном бромидом этидия. Отдельно проводили количественную ПЦР в реальном времени (кПЦР) в реакциях объемом 25 мкл, которые содержали 10 нг кДНК (или) иммунопреципитированной ДНК, 10 мкМ пар праймеров (FW и REV) и 12.5 мкл мастер-смеси SYBR Green PCR Master Mix. Условия ПЦР для qPCR были следующими: 95 ° C в течение 10 минут, затем 40 циклов при 95 ° C в течение 15 с и 65 ° C в течение 1 минуты. В этом исследовании мы использовали три биологических повтора, две обработки (имитацию прививки и прививку), три временных точки сбора после инокуляции (образцы, собранные в: 0, 12, 84 га), и две технические повторы поддерживались для обеих ОТ-ПЦР. и анализы КПЦР. Для нормализации результатов cons7 использовали в качестве гена контроля для всех образцов ткани.Эффективность праймеров была протестирована и проанализирована с использованием ранее описанного метода 2-ΔΔCT [86], где ΔΔCT = (CT гена — CT cons7 ) ткани, которую необходимо наблюдать — (CT genex — CT cons7 ) ткань листа. Нормализованные значения CT (ΔΔCT) из анализа qPCR были собраны и проанализированы с использованием Minitab 17, результаты экспрессии были представлены как среднее ± SE. Односторонний дисперсионный анализ ANOVA был выполнен в экспериментах кПЦР для множественных сравнений между средними значениями выборок.

Вес железного слитка 5e

Да, по правилам 5E винтовка наносит чуть больше урона, чем тяжелый арбалет, поэтому они не боятся некоторых дистанционных атак 2d8.Паладину 18 уровня нечего бояться. В исключительных случаях, учитывая уровень игры, на котором находится наша текущая группа, мы являемся прямыми смертными вассалами полубогов, и в результате у каждого есть 1-2 предмета, которые являются артефактами или эпическими … Непрерывное литье слитков из алюминиевого сплава в прямом охлаждении, MASSIMO DI CIANO BASc, Университет Торонто, 2004 г. ) УНИВЕРСИТЕТ БРИТАНСКОЙ КОЛУМБИИ, март 2007 г…

Это железо чистотой от 99,97 до 99,98% является материалом, который был использован в качестве основы для настоящего расследования. Осажденное железо было очень грубым и шаровидным, но для предполагаемой цели это условие не имело значения, поскольку железо приходилось раскалывать на мелкие кусочки. 6.

Чугун: кастрюли, сковороды и т. Д. 240-20 Керамическая посуда 240-21 Чайная посуда 240-23 Шейкеры для приправ, дозаторы, крышки и т. Д. 240-24 Посуда, кастрюли и сковороды 240-28 Столовые приборы: Ножи, шпатели, стали и т. Д.240-35 Разделочные доски 240-42

Слиток — это кусок относительно чистого материала, обычно металла, отлитого в форму, пригодную для дальнейшей обработки. В сталеплавильном производстве это первая ступень среди литейных полуфабрикатов.

Литье включает как литье слитков, так и литье форм. Слиток используется в первичной металлургической промышленности, имеет простую форму и предназначен для последующего изменения формы с помощью таких процессов, как прокатка или ковка. Формовочное литье включает в себя производство более

Чудесных Предметов, легендарных (Хаотическое добро).Кусок драгоценного материала обманчиво простой формы. Настоящие счастливые слитки были наделены магической удачей от бога удачи, но с тех пор было сделано много копий, из-за чего настоящие были потеряны во времени.

В чем преимущество расчета веса трубы на сайте wcalcul.com? Вы можете легко рассчитать, введя размеры трубы без каких-либо ограничений. Выбрав материал, вы можете детализировать трубу. Вы можете легко рассчитать трубы с помощью расчета труб, которые вы используете в проекте.

Ru58841 стебель волос

Емкость в форме бочонка, сделанная из деревянных клепок и железных обручей.Обратите внимание, что полные значения веса ниже округлены для удобства и предполагают, что средний вес жидкости составляет около 8 фунтов на галлон. Бочка содержит 2 галлона жидкости. Полный вес: 16 фунтов. Бочка вмещает 88 галлонов. Полный вес: 750 фунтов. Бочонок вмещает 10 галлонов. Полный вес: 80 … Эта ржавая железная сфера имеет диаметр 3 дюйма и вес 1 фунт. Вы можете действием произнести командное слово и бросить сферу в Огромное или меньшее существо, которое вы видите в пределах 60 футов от вас. Когда сфера движется по воздуху, она превращается в клубок металлических лент.

Радиолюбительский усилитель УВЧ

С помощью этого метода вы сожжете все свои слоты 5-го уровня, чтобы превратить 21 604 фунта железа в 21 604 фунта железа в другой форме без какого-либо улучшения его стоимости. Просто сделайте стену из железных слитков весом 1 фунт, соединенных небольшими каналами. Согласно SRD 1 фунт железа равен 1 л.

Посмотреть все статьи на этой странице. Предыдущая статья Следующая статья …

5. Катушка металлического инструмента имеет сопротивление 500 Вт и индуктивность 1 Н.Дополнительное сопротивление 2000 Вт подключено последовательно к прибору, чтобы сделать его вольтметром. Он показывает 250 В при подаче постоянного напряжения 250 В. Что он будет читать при подаче напряжения 250 В, 50 Гц? [Отв. 248 В] ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ УПРАЖНЕНИЕ 10.2 ПАРАЛЛЕЛЬНО … Просмотрите список продуктов Google, которые помогут вам работать и отдыхать, оставаться организованным, получать ответы, поддерживать связь, развивать свой бизнес и т. Д.

West game bot

Прогнозируемая последовательность затвердевания слитка 3,25 т при 100 с (a), 500 с (b), 2000 с (c) и 6000 с (d) (показана объемная доля каждой фазы) в цветной карте с 20 уровнями от 0 до 1.

Слиток графитовой формы для металла. Устройство для осмотра капсул со скидкой. Вставка гайки заклепки. Станки для резки алюминия. Эластичный коленный бандаж. Автоматический диспенсер для электрических лент Gsc-80. Солнечная светодиодная лампа. Мини-камера Fuji Film Instax. Рекомендуемые. Электрический мотоцикл мощностью 5000 Вт. Ткань Pp Big Bag. Стеллажи для выставки товаров. 62305 Подшипник. Удобная тележка для сбора историй болезни

6 ноября 2020 г. · Таким образом, хотя один карат в два раза больше веса, лицевая сторона алмаза в полкарата меньше всего на 21%. Качество огранки и диаметр больше веса Итак, как вы можете видеть, хотя вес, как один из четырех факторов, должен иметь для вас значение, потому что он поможет определить, сколько вы собираетесь заплатить, вам действительно следует сосредоточиться на огранке алмаза. сорт и… Слитки железо-вольфрамового сплава 1кг Вес куба вольфрама. 2 956 изделий из железных слитков выставлены на продажу поставщиками на Alibaba.com, из которых на другие металлы и изделия из них приходится 10%, промышленные печи — 7%, а оборудование для литья металлов — 1%. Разнообразные железные слитки …

Виниловые выдвижные шторки для роликов

Baldur’s Gate устанавливают стандарт чеканки торговых слитков — металлических слитков (обычно серебра) приемлемого размера и веса, используемых вместо больших стопок монет. или драгоценные камни для более крупных транзакций.Самый распространенный такой торговый слиток — это слиток весом 5 фунтов, длиной 6 дюймов, шириной 2 дюйма и толщиной 1 дюйм, стоимостью 25 зм.

17 декабря 2011 г. · Лаудуотер импортирует предметы роскоши с Побережья Мечей (например, вино), дорогостоящую продукцию (например, оружие и доспехи) с Побережья Мечей, а теперь и из Науроглота, а также слитки сырого железа из Ллорха. Ллорх экспортирует высококачественное железо с местных рудников и небольшое количество драгоценных металлов, импортируя продукты питания.

Рецепт индукционной плавки. Железный слиток x2 Богатый шлак.Железная руда + песок. 4000 РФ. Утяжеленная нажимная пластина (легкая) + песок. 4000 RF. Железная фляга, инкрустированная серебряными рунами и закрытая латунной пробкой с печатью с выгравированными символами и символами заключения. Непритязательная стальная фляжка с выгравированным на дне названием «Тим». Грубая карта местности, начертанная на потрепанном свитке холста, на котором значком «X» отмечена область, рядом с которой была найдена карта.

Мистер обогреватель 78404

Неделя признания монстров: Фаталис (5-е поколение) — На этой неделе мы познакомимся с Черным драконом, Фаталис! Добавьте сканы фотографий из книги «Карточки охоты на охотников на монстров».Больше избранных изображений Fanon Monster Hunter Wiki — это обширная база данных фанатского контента о серии Monster Hunter. Вики-сайт посвящен сбору всего фанатского контента от фанатов MH, такого как фанарты, фанфики …

11 декабря 2020 г. · Dungeons & Dragons Wiki — это сообщество, созданное и посвященное всему, что связано с D&D. Здесь вы найдете общую информацию о различных выпусках, настройках кампании и справочниках, из которых состоит любимая нам игра, а также об активном сообществе доморощников, ориентированном на авторов.

Слиток метеоритного железа — это предмет, который можно создать при плавке. Для оружия добавляет модификатор Greater Crushing. Используется в доспехах, добавляет модификатор Greater Defense. В ювелирных изделиях метеоритные железные слитки добавляют +2 к силе. … дальнейшие результаты. Металлический слиток. Чугун имеет очень высокое содержание углерода, обычно 3,8–4,7%, наряду с кремнеземом и другими составляющими шлака, что делает его очень хрупким и непригодным непосредственно в качестве материала, за исключением ограниченного применения. Традиционная форма литейных форм, используемых для изготовления чугунных слитков, представляла собой разветвленную структуру, сформированную в песке, с

Komahina fangame

1,155 подписчиков, 281 подписок, 11 сообщений — см. Фото и видео в Instagram от abdou сейчас онлайн (@abdoualittlebit)

Dungeons and Dragons (D&D) Пятое издание (5e) Magic Item — Adamantine Armor — Этот комплект брони усилен адамантином, одним из самых твердых материалов…

Сплавы синтезированы дуговой плавкой в атмосфере аргона на водоохлаждаемом медном поде из элементов Nb, Ta, Ti и V чистотой 99,99 мас.%. Номинальный состав настоящего сплава — Nb 25 Ta 25 Ti 25 V 25 в атомных%. Слиток переплавляли более 10 раз, чтобы обеспечить полностью однородное распределение элементов. Железный слиток — это предмет, используемый в качестве третичного ингредиента для изготовления мешочков из железного титана. Их можно сделать, используя 5 железных прутков или железный пластинчатый корпус в печи с 10-м уровнем Кузнечного дела.По текущим рыночным ценам изготовление одной из них стоит 4955 монет. Чтобы создать слиток, нажмите на печь.

Astragal molding

Четверо из одной семьи приказали покинуть Керри, обвиненные в насильственном беспорядке. Маргарет Харрингтон (41 год), ее партнер Майкл Харрингтон (40 лет) и их племянники Джон О’Брайен (18 лет) и Кристофер О’Брайен (24 года) были обвинены в одинаковых преступлениях в соответствии с Законом об общественном порядке 1994 года.

База данных о зарплатах государственных служащих Ма

Как долго длится теневой бан?

Система защиты от воровства C7

Duang jai pisut eng sub dramacool

Eb3 india predictions

Дата выплаты бонуса Accenture

2020 cargoliner cascadia tv mount

Таблицы округления Проблемы со словами 4-го класса

Smart Life thermometer

Musgon

судьи окружного суда

Hernani da Silva альбом 2020 скачать

91 143 Смесь волков тибетского мастифа на продажу

Не удалось загрузить квест Oculus

Урок 3.3 практика c геометрия ответы страницы 143 149

Google pixel imei repair tool

Создатель таблицы координатной сетки

Unifi dream machine pro firmware 1.7.0

Shimano Grease and oil

Первый продукт Shimano была велосипедная муфта свободного хода, которая также стала первым продуктом Shimano, который был экспортирован в 1931 году. В середине 1950-х годов Shimano расширила свой ассортимент переключателем и трехскоростной ступицей. Shimano Internal Hub Grease разработана для идеальной работы с Nexus, Alfine или любыми внутренними редукторными ступицами, а также со многими другими приложениями.Характеристики: Предотвращает потенциально дорогостоящие повреждения ржавчины или коррозии, вызванные попаданием воды и дорожного загрязнения.

И я оставляю всю смазку внутри подшипника. Думаю, что внутренность должна быть почти на 100% заполнена смазкой. Если он заполнен жиром, он не может быть заполнен водой. Однако, повторимся, смазка, которую я удалил, находится вне подшипника. Так следует ли мне нанести каплю смазки на внешнюю часть моей гарнитуры, на ступицы и каретку? Страница 18: Добавление подлинного минерального масла Shimano и удаление воздуха ОБСЛУЖИВАНИЕ Добавление подлинного минерального масла Shimano и удаление воздуха ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ „Добавление подлинного минерального масла Shimano и удаление воздуха С прокладкой для удаления воздуха (желтой), все еще прикрепленной к суппортам, поместите велосипед в велосипед. Подставка для шланга или что-то подобное, как показано на рисунке.

Масло Shimano Alfine SG-S700 — 50 мл — Y13098481. В наличии. £ 11,99 с НДС Быстрый просмотр. Shimano Grease 125 мл Резьбовой тюбик … Смазка Shimano для задней части Shadow Plus … 23 августа 2017 г. · Когда педали свежие с завода, они поставляются с каплей зеленой смазки Shimano, но вам нужно только смазать пружины каплей средней плотности масла. Добавление слишком большого количества масла просто привлечет …

Unilight — отличная смазка для сопротивления скольжению. Лучшее для карбоновых шайб. Если вы планируете смазывать тормозной механизм, убедитесь, что у вас подходящая смазка.Shimano разработала специальные смазки для своих тормозных систем, и использование заменяющей смазки может серьезно снизить характеристики сопротивления и долговечность. Смазка Tiagra Drag Grease (смазка TBM). Amazon.in: Купите SHIMANO Hydraulic Mineral Oil (100ml) One Color, 100ml онлайн по низкой цене в Индии на Amazon.in. Ознакомьтесь с гидравлическим минеральным маслом SHIMANO (100 мл) одного цвета, обзорами по 100 мл, оценками, техническими характеристиками и многим другим на Amazon.in. Бесплатная доставка, возможен наложенный платеж.

Нам понадобится очиститель деталей для обезжиривания старой смазки с контактных шайб.Поместив шайбы в небольшую стеклянную банку, как описано в предыдущем шаге, накройте ее своим любимым обезжиривающим средством и оставьте на несколько минут в банке. … Недавние Посты. Масло для катушек Shimano Bantam Reel Oil. Смазка для подшипников Ardent. Смазка ReelX. Пурпурное звездное сопротивление Кэла … Более 40 лет я наношу слой смазки, а затем добавляю немного масла. Я разбираю шкивы один раз в год для очистки и смазки, и, если нет каких-либо проблем, не выполняю никакого другого обслуживания. Я ни разу не износил подшипник шкива и не имел проблем с трением…. На моем заднем переключателе Shimano 105 стиль блокировки …

Формы стержней постоянного тока

Официальная домашняя страница суда по налогам округа Кент в округе Кент, штат Делавэр. Суд графства Кент — это правительство вашего графства. Суд Леви состоит из семи избранных членов Комиссии, шесть из которых избираются от округов, в которых они проживают, а седьмой избирается в целом и представляет весь округ.

Physics Van The Illinois Physics Van — это передвижное научное шоу для детей! Выполняя и объясняя захватывающие демонстрации физики, мы показываем нашей аудитории, что наука — это весело и полезно для людей, которые задаются вопросом, почему мир действует именно так.

В Регистре сделок (ROD) регистрируются земельные книги. Это включает сбор за подачу и регистрацию документов; подготовка точных и своевременных отчетов и бумажных копий земельной документации для использования другими департаментами графства, архивами Южной Каролины и общественностью; поддержание системы обработки изображений документов; и помощь в изучении земельных записей как в электронном, так и в ручном режиме.

Сл заклинания — это целевое число для спасброска. Чтобы вычислить DC заклинания: 10 + уровень заклинания + модификатор способности (e.грамм. Волшебники используют INT, клерики используют WIS, барды используют CHA) DC заклинания отличается от DC, связанного с Ex (экстраординарным) и Su (сверхъестественным) способностями, такими как способность канала энергии Клирика.

Для ведения законного и соответствующего требованиям бизнеса DC требуются лицензирование и регистрация. Большинство предприятий в округе организованы или зарегистрированы в отделе корпораций DCRA. Многие из них имеют одну или несколько базовых бизнес-лицензий, выданных Отделом бизнес-лицензирования DCRA.

Немедленная загрузка бланков документов на недвижимое имущество.Конкретное государство — Соответствие — Правильные формы прямо сейчас. Deeds.com — Упрощение сделок с недвижимостью с 1997 года.

Майк Холт прошел путь от ученика электрика до подрядчика в области электротехники и стал одним из самых признанных экспертов в мире в области электроустановок. Он был электриком-подмастерьем, старшим электриком и подрядчиком по электрике. В 1974 году Майк осознал необходимость качественного обучения электричеству и открыл компанию Mike Holt…

Миссия Регистратора дел состоит в том, чтобы обслуживать жителей графства Сассекс, правильно записывая и индексируя документы, своевременно и эффективно, вежливо отвечая на запросы о помощи и информации, собирая и должным образом учитывая соответствующие сборы и налоги, а также путем предоставления каждому сотруднику мотивации, обучения и опыта.

Рецепты лосося youtube

(b) Прямая машина постоянного тока? (3) Совместная подгонка и внутреннее выравнивание.(а) Допустимо внутреннее выравнивание? Да (б) Совместное разрешение приемлемо? Да (c) Окончание подготовки приемлемо? (4) Заправочный стержень (a) Заправочный стержень из нержавеющей стали AWS A5.9? Класс (b) Заправочный стержень: (5) Продувочный газ. (a) тип продувочного газа: Диаметр продувочного потока (b) продолжительность продувки: Coo SCFH Electrode, Comp-f1a03cc9-a485-4311-a81b-96931a7b5696, DC-wus-prod-a14, ENV-prod-a, PROF -PROD, VER-20.0.40, SHA-41ed8468826085770503056bd2c9bc8be5b55386, CID-77a583e1 …

Dhilo somali

«Район», или просто «округ Колумбия»; столица США.Округ Колумбия находится на федеральной земле и не является частью какого-либо штата. В округе Колумбия, чтобы наложить залог по решению суда, кредитор подает заявление о залоге по судебному решению в Регистратор сделок округа Колумбия. Срок залогового права по решению DC составляет 12 лет, даже если имущество должника переходит из рук в руки.

ООО «Ожат» готово помочь Вам с приобретением MD10-TA / 50 OBSOLETE- REPLACED BY DS3-TA / 10N-D24K1 24 V DC и других продуктов и запасных частей Duplomatic. Свяжитесь с нами, чтобы получить помощь от эксперта по продажным ценам на Duplomatic — MD10-TA / 50 OBSOLETE- REPLACED BY DS3-TA / 10N-D24K1 24 В постоянного тока в Турции.

Крупнейший парк сварочного и позиционирующего оборудования в Северной Америке КЛАССИФИКАЦИЯ СВАРОЧНЫХ ЭЛЕКТРОДОВ ЭЛЕКТРОДЫ С МЯГКИМ СТАЛЬНЫМ ПОКРЫТИЕМ E7018-X E Означает, что это электрод. Способность превращаться в форму с божественными способностями, способностями, навыками и чертами. Вариация переключения режимов. В отличие от Devil Mode. 1 Также называется 2 Возможности 3 Приложения 4 Ассоциации 5 Ограничения 6 Известные пользователи 6.1 Мультфильмы / Комиксы 6.2 Аниме / Манга 6.3 Видеоигры 6.4 Веб-анимация 7 Галерея Всемогущий режим Божественный режим Высший режим Превосходный режим Абсолютный режим Пользователь есть…

Новый 1 на 1 с любым кодом оружия

ROD 16, пересмотренный 08/2012 УВЕДОМЛЕНИЕ ОБ УДОСТОВЕРЕНИИ МЕХАНИКА Правительство округа Колумбия Управление налоговой и налоговой регистрации сделок 1101 4th Street, SW Вашингтон, округ Колумбия 20024 Телефон (202 ) 727-5374 Дата уведомления: мм / дд / гггг _____ Проект 1: Текущий / Завершенный / Прекращение Если проект был завершен или прекращен,

Округ

объявляет о зимних праздниках, новогодних графиках Большинство правительственных учреждений DCo будут закрыты Декабрь24-25 и 28 января и 1 января

Очистить форму. Загрузка Наши записи содержат информацию о федеральных заключенных, содержащихся в тюрьмах с 1982 года по настоящее время. … 25 января 2010 · ОБНОВЛЕНИЕ 1. Теннис-Федерер достигает максимальной формы, чтобы положить конец надеждам Хьюитта. Автор Джулиан Линден. 3 минуты чтения … Номер один в мире мчался к триумфу 6-2 6-3 6-4 менее чем за два часа на переполненной арене Рода Лейвера …

D addicts subtitles

Защита членов нашей команды Во время COVID-19. Мы работаем над защитой здоровья и безопасности членов нашей команды с помощью основанных на фактических данных очистки и санитарии, инновационных технологий и подробного обучения, а также соблюдаем правила Sunrise, CDC, CMS, государственные и местные правила.

Загрузить презентацию: https://drive.google.com/open?id=0B69QMG6D5UbIU1hjcEZ0LV94N1E Содержание: 0: 00 Введение0: 13 Что такое анализ схем? земельные записи. Пользователи могут искать документы, многие договоры аренды и сервитуты. Налоговые формы и публикации также доступны для скачивания. Существуют формы для документов, налогов на регистрацию и передачу прав, залогов, освобождений, кондоминиумов и отчуждения права выкупа. Vacant Properties, Постановление о разводе Верховного суда округа Колумбия — Комната 4335 500, Индиана Авеню N.W. Вашингтон, округ Колумбия, 20001 (202) 879-1261: Развод: до 16 сентября 1956:

Сбои Mk11

Домашняя страница Southern Company. Edison Electric Institute (EEI) сегодня наградил Southern Company самой престижной наградой в области электроэнергетики — премией EEI Edison Award.

ФОРМА УЗЛОВ. Анкеры, опалубка каменного моста Вешалки для мостов Стяжки для спиралей Стержни из стекловолокна и крепежные детали Плоские стяжки Вставки Подъемное оборудование Стержень карандаша и крепежные детали Сборные арматурные распорки Она скрепляет болтами Стяжки, стержни для карандашей и крепеж.ЗАПЛАТКА, БОНДЖИ И ЗАПОЛНЕНИЕ. Связующие вещества, предотвращающие отслаивание Цементный раствор, герметики для бетона Отверждение, отверждение и герметизация …

SMS group является поставщиком оборудования для металлургической промышленности по производству стали, алюминия, меди и металлов. В компетенцию входят проектирование, инжиниринг, производство и ввод в эксплуатацию. Сварочные аппараты AC-225 и AC / DC 225/125 идеально подходят для сварки общего назначения, включая низкоуглеродистую, низколегированную и нержавеющую сталь, а также чугун для обычных ремонтных работ и хобби.

Vw passat b6 Расположение модуля управления комфортом

Памятники и мемориалы, эклектичные районы, настоящий местный колорит — Вашингтон, округ Колумбия, — место, не похожее ни на одно другое. Это ваш дом вдали от дома с бесплатными музеями, превосходными ресторанами и многим другим. Спланируйте свою поездку, отметив все, чем можно заняться, где можно поесть и где остановиться. Мы увидим вас скоро.

Кодекс содержит основные формы для действий, включая конкретный язык и минимальные требования к содержанию (42-601).Согласно уставу, в каждой сделке с недвижимостью должны быть указаны: — дата подписания (исполнения). Дата исполнения определяет день, месяц и год вступления в силу передачи земли.

ROD 1 — Налог на регистрацию и передачу недвижимого имущества FP 7-C. Регистратор сделок, администрация налогового и налогового управления, является официальным хранилищем всех земельных записей и общедоступных документов округа Колумбия. Офис несет ответственность за сбор всех регистрационных и трансфертных налогов и сборов за регистрацию регистрируемых инструментов и ведет эти записи для публичной проверки.Пользовательские онлайн-картографические приложения DC. Карта 311 запросов. Инструмент для визуализации всех запросов на обслуживание, зарегистрированных за последние 30 дней. Скачать приложение для Android.

Wpf combobox selecteditem (двусторонняя привязка)

Зона сварки обычно защищена каким-либо типом защитного газа, пара или шлака. Процессы дуговой сварки могут быть ручными, полуавтоматическими или полностью автоматизированными. Дуговая сварка, впервые разработанная в конце XIX века, стала коммерчески важной в судостроении во время Второй мировой войны.

Прайс-лист Dhl за кг ksa

Beauty Angel Vibra shape 7200

Obra percent2790 Требования к консультированию

Практический тест Ati a 2019

Note3 9114 Щенки Akc Sheltie на продажу калифорния

Gen 2 pmag sand

Колпачки для регулировки прицела Simmons